[科普中国]-[原创]中华鳖微生物检查的技术要求

微生物检查是诊断由细菌、病毒感染引起的传染性鳖病最有效的方法之一，该方法通过从鳖体直接分离病原，经培养、鉴定、动物试验等确定此分离物是否为该传染性鳖病的病原以及病原的种类。

一、细菌性病原的分离与鉴定

①将濒死病鳖用无菌水洗净，并用70%酒精擦拭消毒，在无菌条件下解剖。

②取病鳖体表病灶、血液、内脏器官的病变组织等，用接种环反复插入后，划线接种于普通营养琼脂平皿，倒置放人28℃恒温箱中培养24小时，分离纯化。

③观察各菌落形态，并挑取各菌落进行涂片，经革兰氏染色和鞭毛染色后，在高倍光学显微镜下观察细菌形态，也可取细菌培养物铜网上制膜，2%磷钨酸负染后，用透射电镜观察细菌的超微结构。

④进行生理生化试验，确定分离菌株的生长适温、理化特性。根据细菌菌落特征及菌株的形态、理化特性，参考《常用细菌系统鉴定手册》、《伯杰氏细菌鉴定手册》等资料，确定病原菌的名称。

⑤动物回归试验：将分离纯化的菌株感染健康中华鳖，观察是否发病及发病症状与自然发病症状是否类似；若类似，对人工感染发病的鳖重新进行细菌的分离鉴定，分离鉴定出的病原与感染接种病原相同，可证实此分离菌株为该鳖病病原。

⑥药物敏感试验：用纸片扩散法检测分离细菌病原对常用药物的敏感程度，从而指导生产用药。

二、病毒性病原的分离与鉴定

分离病毒的方法很多，这里介绍一种比较简单的方法。

①解剖病鳖，取肝、脾、肾等内脏器官，用灭菌生理盐水洗2～3次后，剪碎，匀浆机匀浆，加人含800～1000国际单位/毫升青霉素、链霉素的Hank's液，制成10%～20%的组织悬液，再以2000转/分钟离心10～20分钟；取上清液，使其通过0.2微米的细菌滤器除菌。

②取滤液接种健康鳖，观察动物是否出现与自然发病相似的症状。若出现相似症状，可证明该鳖病为病毒性疾病。但要鉴定为何种病毒，需要继续进行电镜观察和特定的生理生化实验，确定其核酸类型和生物学特征。

③对常见病毒可进行血清学实验、PCR鉴定或免疫学鉴定等。

编辑：王大伟