[科普中国]-鞭毛染色法

鞭毛的有无、多少和着生方式是细菌鉴定中的重要指标。在一般情况下，细菌的鞭毛因为太细(直径为10～20nm)，故普通光学显微镜下无法观察。但通过特殊染色方法使染料沉积在鞭毛上使其加粗，就可克服上述困难。鞭毛染色方法很多，现介绍常用的3种。

简介鞭毛的有无、多少和着生方式是细菌鉴定中的重要指标。在一般情况下，细菌的鞭毛因为太细(直径为10～20nm)，故普通光学显微镜下无法观察。但通过特殊染色方法使染料沉积在鞭毛上使其加粗，就可克服上述困难。鞭毛染色方法很多，现介绍常用的3种。1

硝酸银法染色操作：一、选用洁净载玻片。二、配制染料，A液为丹宁酸5g，FeCI3 1.58，蒸馏水100ml，待溶解后，加1% NaOH 1ml和15%甲醛2ml。B液为AgNO32g，蒸馏水100ml。待AgNO3溶解后，取出10ml作回滴用，即向90ml B液中滴加浓氢氧化铵溶液，当出现大量沉淀时再继续滴加，直至溶液中沉淀刚消失变澄清止。然后用保留的10ml B液小心地逐滴加入，至出现轻微和稳定的薄雾为止(此操作重要!)。在整个滴加过程中要边滴边充分摇荡。配好的染色液当日有效，4h内效果最好；三、菌液制备及涂片，取普通变形杆菌(Phote。oulgaris)等运动力强的菌种，在合适培养基上连续移种几代，然后取用幼龄菌体制成悬液，在37℃温箱放置10min，使鞭毛松开。挑取悬液于玻片一端，倾斜玻片，使菌液慢慢流向另一端，用吸水纸吸取多余菌液后，气干；四、染色，先滴A液，染4～6min后用蒸馏水充分洗净，再滴B液，在微火上加热0.5～1 min(不使干涸)，最后用蒸馏水洗后自然干燥；五、用油镜观察。结果菌体与鞭毛均呈深褐至黑色。1

Leifson氏法(1930年)配制染料KAl(SO4)2饱和水溶液20ml，20%鞣酸10ml，蒸馏水10ml，95%乙醇15ml，碱性复红(95%乙醇饱和溶液)3ml。依次加人后充分混匀，放入试剂瓶中盖紧(可保存1周)。染色操作：制备良好的涂片；滴加染液，30℃左右放置10Min；自来水洗；在室温下用硼砂美蓝(美蓝0.18、硼砂1g加蒸馏水100ml配成)复染(也可省略此步)；自来水洗净、气干和镜检。结果鞭毛红色，细胞蓝色。1

Bailey氏鞭毛染色法(1929年)本法适用于对土壤和水中无芽孢杆菌或植物病原细菌等易脱落鞭毛的染色(因它们长有的荚膜易使鞭毛脱落)。媒染剂配制：A液10%鞣酸18ml，6%FeCl3·6H2O 6ml；B液：A液3.5ml，0.5%碱性复红(乙醇溶液)0.5ml，浓HCl 0.5ml，福尔马林2.0ml。染色操作：用幼龄菌液涂片；将过滤后的A液滴加在涂片上，放置3.5min(不加热)；倾去A液(不必清洗)，加上过滤后的B液，放置7miri(不加热)；用蒸馏水洗；滴加Zieht氏石炭酸复红，微火上加热1min；用自来水冼；气干后镜检。结果鞭毛红色。1

本词条内容贡献者为:

李丽霞 - 博士 - 西北农林科技大学