[科普中国]-荚膜染色法

荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质，其主要成分是多糖类，不易被染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景着色，而把不着色且透明的荚膜衬托出来。荚膜很薄，易变形，因此，制片时一般不用热固定。荚膜染色主要用于炭疽杆菌病料的荚膜检查。1

基本原理荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质，其主要成分是多糖类，不易被染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景着色，而把不着色且透明的荚膜衬托出来。荚膜很薄，易变形，因此，制片时一般不用热固定。

荚膜染色主要用于炭疽杆菌病料的荚膜检查。因为炭疽杆菌荚膜系由d-谷氨酸组成的多肽所构成，而菌体的主要成分则为核蛋白，因二者着色力不同，染色水洗后，则可把荚膜上一部分染料冲洗掉，颜色变淡，故显微镜检查时，在着色较深的菌体周围看到一圈呈淡紫色的膜，即荚膜。又因碱性美兰是一种多染性染料，故菌体染为蓝色，荚膜则染成淡蔷薇色。1

操作步骤1.涂片：在洁净无油腻的玻片中央放一小滴蒸馏水（或用接种环挑1-2滴水），用无菌的接种环挑取少量菌种与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜，涂布面积约1cm2 。

2.干燥：涂片在室温下使其自然干燥，也可以小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。

3.固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过微火三次（手指触摸反面不烫手为宜），待玻片冷却后，再加染色液。

4.染色：玻片置于玻片搁架上，加适量（以盖满菌膜为度）草酸铵结晶紫（或石炭酸复红染液）于菌膜部位，染色1-2min。

5.水洗：斜置载玻片，在自来水龙头（或洗瓶）下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。

6.干燥：自然干燥或用吸水纸吸去涂片上的水，用吸水纸时切勿将菌体擦掉。

7.镜检：用高倍镜和油镜观察并绘细菌形态并绘图于记录表中。1

主要类型（1）黑斯荚膜染色法
①在荚膜菌涂片上（在空气中自然干燥，无需加热固定）放一小块滤纸片，之后滴加结晶紫染液。
②在火焰上微微加热，使玻片上染液冒蒸汽为止。
③用200g/l硫酸铜水溶液冲洗染液，切勿用流水冲洗。用吸水纸吸干后油镜检查。
结果：菌体呈紫色，荚膜呈淡紫色或无色。

（2）密尔荚膜染色法
①制片。常规法制片，干后加热固定。
②染色。加石炭酸复红液。微加热染1min，水洗。
③媒染。加特殊媒染剂，作用0.5min，水洗。
④复染。加碱性美蓝液，染1min，水洗。
⑤镜检。干后油镜检查。
结果：菌体呈鲜红色，荚膜呈蓝色。

（3）奥尔特荚膜染色法涂片、自然干燥、火焰固定后滴加染液，经火焰加温使染液产生蒸汽后，继续染3min，水洗，待干，镜检。
结果：菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。

（4）湿墨水负染法
①加一滴墨水于洁净的载玻片上，然后挑取少量菌体与其混合均匀。
②将一洁净盖玻片盖在混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压以吸去多余的混合液。加盖玻片时勿产生气泡，以免影响观察。
③高倍镜或油镜检查。
结果：背景灰色，菌体较暗，在菌体周围呈现明亮的透明圈。

（5）干墨水负染法
①加一滴60g/l葡萄糖液于洁净载玻片的一端，然后挑取少量菌体与其混合，再加一环墨水，充分混匀。
②另取一端边缘光滑的载玻片作推片，将推片一端的边缘置于混合液前方，然后稍向后拉，当推片与混合液接触后，轻轻左右移动，使之沿推片接触的后缘散开，尔后以大约30°角迅速将混合液推向玻片另一端，使混合液铺成薄层。
③空气中自然干燥。
④用甲醇浸没涂片固定1min，弃去甲醇。
⑤在酒精灯上方用文火干燥。
⑥用甲基紫染1—2min。
⑦用自来水轻轻冲洗，自然干燥。
⑧高倍镜或油镜检查。
结果：背景灰色，菌体紫色，菌体周围为清晰透明的荚膜。

（6）石炭酸复红液染色法
①取培养了72h的荚膜菌制成涂片，自然干燥（不可用火焰烘干）。
②滴加1—2滴95%酒精固定（不可加热固定）。
③加石炭酸复红染液染色1—2min，水洗，自然干燥。
④在载玻片一端加一滴墨水，用一块边缘光滑的载玻片与墨水接触，再以匀速推向另端，涂成均匀的一薄层，自然干燥。
⑤干燥后用油镜观察。
结果：菌体红色，荚膜无色，背景黑色。2

本词条内容贡献者为:

吴俊文 - 博士 - 厦门大学