[科普中国]-血涂片染色

血涂片染色是指利用Wright’S染液来对血液涂片进行染色的方法。1

基本原理瑞氏染色法原理

1、瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料。

美蓝(又名亚甲蓝mehyleneblue)为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构，通常为氯盐，即氯化美蓝，美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青)市售美蓝中部份已被氧化为天青。伊红(又名曙红cosin)通常为钠盐即伊红化钠。美蓝和伊红水溶液混合后产生一种憎液性胶体伊红化美蓝中性沉淀，即瑞氏染料。瑞氏染料溶于甲醇后，又重新解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。

2、细胞的染色既有物理的吸附作用又有化学的亲和作用。各种细胞和细胞的各种成份化学性质不同对各种染色料的亲和力也不一样。因此用染色液染色后在同一血片上可以看到各种不同的色彩，例如血红蛋白嗜酸性颗粒为碱性蛋白质与酸性染料伊红结合染粉红色称为酸性物质，细胞核蛋白和淋巴细胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染蓝色或紫色称为嗜碱性物质，中性颗粒成等电状态与伊红和美蓝均可结合，染紫红色称中性物质。

制作方法血涂片 Wright’S染色法。①采血、制血膜、水平放置血膜片晾干。②血膜片固定于甲醇 2~ 3min，取出晾干。③用蜡笔在血膜片两端划一染色区，避免染色时染液外溢 。④往血膜片滴加瑞氏染液 (瑞氏染料 0．1g+甲醇 60m1)，数十秒钟后 ，再加一倍于染液的蒸馏水 ，染色 5~8min。⑤用磷酸缓冲液 (磷酸二氢钾 6．63g+ 磷酸氢二钠 2．56g+ 蒸馏水 1000m1)或蒸馏水轻轻冲洗血片，并不时镜检调色 ，至颜色合适为止。⑦血片晾干后封固。结果显示 ：血细胞数量较多、分布均匀、形态结构典型、色泽和清晰度良好。2

操作步骤1、用毛细吸管吸取EDTA抗凝的外周血5-7UL，或者直接采集患者末梢血，将血滴滴至载玻片的一端约1CM处或整片的3/4端。有磨砂片的玻片，可在接近磨砂头的部位来水反复冲洗，然后擦干备用。

2、左手持载玻片，右手持玻片，将推片接近血滴处，然后轻轻接触血滴并压在血滴上，使血液呈“￣”字型展开，充满推片宽度。

3、将推片与载玻片形成30度夹角，用均匀的速度将血向载玻片的另一端推动。红细胞压积发生变化时，应适当的调整推片与载玻片的角度以及推动血液是的速度。标准的血涂片应做到头、体、尾分明，两边和两端留有空隙。

注意事项①选用的玻片应洁净干爽、无污物潮湿 ，否则 ，有可能出现血片不洁、血细胞被玻片上的杂物损坏、以及 “潮湿”使血细胞着色产生偏差等不 良后果。

②血膜厚薄要适宜 ，太厚或太薄均不好 ，太厚不仅容易造成血细胞过多过密 、血膜片浓染 。而 日．，常会使部分 血细胞浓缩变小 、形态不佳 。太薄 ，血片的血细胞偏少 ，用于教学不理想 。每张血片的采血量约半粒黄豆大小为宜。推血片时，推片与血膜片约呈 45。夹角 ，这样制成的血膜的厚薄较为合适。

③刚推好的、血液未干的血膜片要水平放置晾干。若此时直立放置 ，血液就会向下流动，很多血细胞就会跑到血液流向方血膜片一侧的边上 ，以至血膜片中央大部分 的血细胞数量相对减少。

④染色前 ，用甲醇将血膜片固定 ，能更好地保存血细胞的完好和完整，避免其变形、收缩和破碎 。

⑤注意制作方法中的三处 “晾干”，否则 ，可能会产生血细胞着色不良、染色效果不好以及血片质量不佳等结果。

⑥封固血片，可更好 、更长时间保存之。封固剂通常选用 中性树胶 ，我们尝试用香柏油封固，发现其效果较好，血涂片更清晰、更不易褪色 ，但较难干。2

本词条内容贡献者为:

赵阳国 - 副教授 - 中国海洋大学