[科普中国]-麝香草酸浊度试验

测定血浆蛋白的水平和分析其成分是肝脏疾病重要试验之一。有关这方面的测定在别外章节中已有详尽讨论，本节中主要叙述一些和蛋白质代谢有关的简单血清胶体稳定试验。各种血清胶体稳定性试验的原理基本相同，但所用的试剂不同，促进和抑制絮浊的作用有差异，目前临床常用的有TTT试验。正常值

0-6u。

临床意义各类血清胶体稳定性试验在不同的肝病或同一疾病的不同时期，其阳性率可有差异，各有其一定临床意义。 (1) 急性肝炎的诊断：在急性肝炎和急性肝损害时，各类血清絮状、浊度试验均可出现阳性，总阳性率约80%-90%。TTT于发病一周开始升高，二周时达高峰，以后逐渐降至正常。这些改变可在黄疸前期即出现，故对急性肝炎有早期诊断意义，但不如转氨酶敏感，阳性率也比转氨酶低。出现阳性时期较转氨酶为迟，这是因为蛋白质的更新须有一定时间，如白蛋白的半寿期10-36天，因此肝脏疾病引起的蛋白质的变化常需一定时间才能表现出来。在无黄疸型肝炎病例，血清胶体稳定性试验常可作为诊断的敏感指标。如急性肝炎絮浊试验持续阳性，提示肝病有转入慢性化的趋势。 (2) 肝炎与肝硬化病情的判断：在急性肝炎时，TTT的变化和血清脂质升降相平行，但随着病变的迁延化、慢性化、则与血清γ球蛋白呈正相关，故TTT持续阳性是肝病迁延化、慢性化的反映。 (3) 阻塞性黄疸与肝炎的鉴别：当阻塞性黄疸患者尚无肝细胞损害时，各类血清絮浊试验多属阴性，与急性肝实质损害时不同，对于鉴别黄疸类型有一定价值。但在长期阻塞性黄疸或合并感染的病人，肝实质亦常有损害，此试验亦能呈阳性，但一般见于病程中、后期。在长期黄疸病例，如血清絮浊试验持续阴性，应考虑先天性黄疸的可能。 (4) 严重妊娠恶阻与妊娠合并肝炎的鉴别：妊娠恶阻时可出现中度的高胆红素血症和转氨酶升高，但血清絮浊试验几乎全都正常；相反，妊娠合并肝炎时则在90%以上病例血清絮浊试验均呈阳性反应。 (5) 脂肪肝时，TTT常升高。有人测定TTT/ZnTT比值，发现在脂肪肝时较慢性肝炎为高，认为可借此比值变化作为两者鉴别诊断的参考。在转移性肝癌时，TTT值较原发性肝癌时为低，因此对肝癌病例，此试验呈低值者宜先考虑转移性肝癌，呈高值者优先考虑原发性肝癌，但这仅有参考价值，主要还应根据临床。在血吸虫性肝硬变时，血清絮浊试验常可阳性。 (6) 肝外疾病：血清胶体稳定性试验对肝病并不具有特异性，在其他可发生白蛋白减少、球蛋白(γ或β球蛋白)或类脂质增加的疾病如疟疾、结缔组织疾病、黑热病、亚急性细菌性心内膜炎、多发性骨髓瘤等疾患时，亦可呈阳性反应。

注意事项TTT是一个很简单的试验，但各试验室间出入往往不小。造成此差异因素很多;首先是虽然同称为TTT试验，但各个实验室在试剂配制，标准曲线绘制或标准管配制方法上并不相同。 (1) 国内所报告的TTT单位为Shank(襄克)单位。1944年Maclagen(麦克莱根)首先建立TTT试验，当时以Kingsley(金斯莱)尿蛋白比浊管表示TTT浊度单位(相当于10mg/dl尿蛋白溶液加磺柳酸所显示的浊度为一个Maclagan单位)。后来，Shank和Hoagland改用BaSO4悬液作为浊度标准，由0.0962mol/L BaCl2加H2SO4所产生的浊度相当于Maclagan所应用的Kingsley标准。但在发表文章 时，误印为0.0962N BaCl2，因此测定结果为麦氏单位的二倍(1个麦氏单位=2个Shank单位)。 (2) 血清要新鲜，应早晨空腹抽血。用分光光度计比浊法测定麝浊时，如血内脂质较多，可用生理盐水6ml代替缓冲液稀释血清，作空白管。 (3) 麝香草酚-巴比妥缓冲液的pH应在7.50-7.60。pH增高，敏感度降低，可出现假阴性;pH降低，敏感度升高，可出现假阳性。 (4) 为了简化手续，不少实验室用100g/L麝香草酚乙醇溶液，直接加入巴比妥缓冲液中，省去结晶和过滤步骤，但此配方较原法多含1%乙醇，试验结果表明比原配方的浊度偏离约20%，絮状试验阳性率反而降低。 (5) 麝香草酚浊度试验结果随温度的改变而有所变化。一般是温度高，浊度低;温度低，浊度高。为了克服这一误差，可以从表1上将不同温度下的浊度结果换算成25℃的结果以便于比较。 使用说明：以6u一行为例，在10℃时测定的6u，实际上在25℃时为4.7u。在30℃时测定的6u，在25℃时为7.2u。余类推。 (6) 配制硫酸钡标准比浊管时注意以下几点：①硫酸试剂的浓度硫酸在反应中虽然是过量的，但当浓度小于0.1mol/L，形成的硫酸钡浊度低;浓度大于0.1mol/L浊度增高。因此，硫酸试剂须严格校正至0.1mol/L。②反应温度：10℃时形成的硫酸钡颗粒细，浊度较高，结果重复性好。25℃、30℃、37℃时形成的颗粒较粗，浊度较低，重复性不易控制。③操作手法：混和方法不同，形成的硫酸钡颗粒大小不同，结果相差很大。所以，每次按规定操作可提高精密度。 (7) 麝香草酚缓冲液易变质，但如保存于冰箱中，可因结晶逐渐析出而降低敏感度，故平时使用时，仍应置室温中，如显混浊，即不能用。 (8) 麝香草酚应为洁白晶体，如带黄色，须重结晶处理。可按下法重结晶精制：取麝香草酚100g，溶于100ml 95%乙醇中，以吸滤漏斗过滤。滤液中加入于100ml冷蒸馏水，混匀。静置20min后吸滤，用冷蒸馏水洗结晶两次，可得到洁白的结晶，置干燥器内待完全干燥后使用。 (9) 用巴比妥配制的试剂不能久置，超过2周后，TTT结果有增高趋势，一个月后明显偏高。一般认为此试剂不稳定与巴比妥有关，因为久置后，巴比妥试剂的红外线吸收曲线已有明显变化。本文所介绍麝香草酚-Tris-HCl缓冲液，具有稳定性高，所配TTT试剂放室温至少可保存3个月，且浊度结果受室温变化的影响小。 (10) 光电比浊法与光电比色法有所不同，比浊法混浊液除了吸收一部分入射光以外，悬浮的颗粒还能使一部分入射光反射和折射，因此光电池所感受的光除了经过吸收以后的出射光外，还有折射的光，后者不是平行光束，混和液和光电池之间距离越大，则折射光的影响越小。所以在采用72型分光光度计比浊时，比色杯的位置应放在比色杯座的远光电池的一边，可以提高准确度。 (11) 麝香草酚缓冲液中麝香草酚含量是影响结果的重要因素之一。浊度单位高低和麝香草酚含量成正比，要求使用25℃的麝香草酚饱和溶液。 缓冲液中麝香草酚含量测定法：麝香草酚标准液(1ml含0.1mg)：准确称取试剂规格麝香草酚100mg，加水溶解后加水至1L。 取待测麝香草酚缓冲液1ml，用水稀释至10ml，以后按表2进行测定。 混匀37℃水浴放置15min，750nm比色，以空白管校正吸光度至零，读取各管吸光度，按下式计算：

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1本词条内容贡献者为:

顾春刚 - 副主任医师 - 天津市第三中心医院 病理科