[科普中国]-miRNA检测

miRNA检测是一种检测生物体内miRNA表达情况的技术，包括Northern杂交、微阵点分析、实时定量PCR等。检测miRNA的表达丰度，对疾病的诊断和治疗具有一定的意义。

常见检测方法1．Northern杂交
该方法通过将RNA变性及电泳分离后，将其转移到固相支持物上，从而用于杂交反应，Northern杂交不仅能够灵敏检测出RNA的丰度，还能结合RNA marker来检测RNA的分子大小，这对于排除其他小分子RNA的污染有重要意义。Northern杂交也可用作miRNA的定量分析，只需将已知浓度梯度的寡核苷酸对照物与待测样品进行平行杂交即可。该方法的缺点是耗时、耗量，一次检测需要3个工作日，需要5到10微克的总RNA量才能成功检测出miRNA。
2．微阵点分析
采用高密度的荧光标记探针与RNA样本杂交，通过荧光扫描获得表达图谱，借助相应软件进行miRNA的表达分析。由于在设计探针时可以包含所有可用miRNA序列，因此微点阵可以作高通量的miRNA分析。不足之处在于需要足够的RNA初始样本，大约为每个微点阵5微克。
3．实时定量PCR
该方法主要是在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。既可检测miRNA前体，又可检测成熟miRNA的表达。与杂交方法相比，实时定量PCR可以高度灵敏地检测出低丰度表达的靶分子，也常用于miRNA表达谱结果的鉴定。目前已有新的实时定量PCR的方法，利用茎环状引物进行miRNA的反转录，然后再进行实时定量PCR。
以上三种检测方法中，Northern杂交法是验证和确认miRNA的重要方法，但比较繁琐且灵敏度低，不适于临床样本的高通量检测；实时定量PCR法是最方便使用且有效的检测方法。

临床应用由于miRNA具有高度特异性、高度保守性，可以提高疾病诊断的准确性和精确度。另外，根据miRNA时序性的变化特点，可以针对患者血浆、血清、尿、唾液中的miRNA表达的变化确定患者疾病的进展情况，并制定相应的个体化治疗方案。此外，miRNA检测对新型生物医药制剂的研发也具有重要意义。