[科普中国]-无花果丝孢酵母

脂肪酶的概述

近三十年来，脂肪酶的应用开发已从食品、助消化剂、化妆品、皮革加工、洗涤剂等领域扩伸到脂肪酸生产、油脂加工、有机合成化工产品、香料及药物制备。八十年代以来，脂肪酶在应用方面的开发研究加快了步伐，除水解油脂已进人工业化外，利用脂肪酶不需要辅酶就能催化正逆反应用其专一性等优点，在有机溶剂中催化酶合成及酯交换反应、改性油脂的生产、消旋化合物拆分等众多领域显示出开发前景。

脂肪酶可分为动物脂肪酶、植物脂肪酶及微生物脂肪酶。微生物脂肪酶可用发酵法进行工厂化生产，生产周期短、规模大。

无花果丝孢酵母的分离产脂肪酶菌株初筛方法：将待分离样品稀释法分离为纯菌株，将各纯菌株接种于含有溴甲酚紫的油脂同化平板上，30℃培养1小时。产脂肪酶的菌株能分解油脂生成脂肪酸，使溴甲酚紫由紫色变为黄色，形成变色圈。以菌落直径与变色圈直径之比为初筛依据。

产脂肪酶菌株复筛方法：将待测菌接于100mL发酵培养基中，30℃，摇床培养，定时测其脂肪酶活性。

脂肪酶活性测定方法：脂肪酶活性单位定义：37℃10分钟油脂水解反应。将lml发酵液每分钟分解底物产生lμmol脂肪酸定义为一个酶活单位1。

无花果丝孢酵母的鉴定属的鉴定（1）液体培养特征：麦芽汁培养基28℃静置培养48小时，培养液较清，液面上形成一层酸膜，没有气泡不发酵。

(2)菌落形态：麦芽汁平板接种，28℃，7天，菌落白色，较大，表面干燥，有放射状菌丝线，边缘呈细微毛边。20℃，15天后菌落长满平板。

(3)个体形态：马铃薯固体培养基画线接种后，斜插入一盖片，28℃培养5天，显微镜观察盖片上菌丝形态：有较长的真菌丝，菌丝有横隔膜，在菌丝的末尾一端有许多横隔膜，把菌丝切成条砖形，断裂成单个细胞，排列成一左倾一右倾的细胞断链，即形成节孢子。亦有芽殖，为多边芽殖。无八叠式细胞群。

(4)孢子鉴定：不形成子囊饱子，不形成掷孢子，也不形成冬孢子及担孢子，显微镜下观察有大量节孢子，也有少量厚壁孢子。

由以上特征，据《酵母菌分类学》，该菌为真菌门、半知菌亚纲、丛梗孢目、隐球酵母种，丝孢酵母属(Trichosporon)。

种的鉴定据王利1984年版《酶母菌分类学》，丝孢酵母属共有15个种，按鉴定检索表进行生理试验，结果为：不同化硝酸盐，不发酵葡萄糖，同化乳糖，无八叠状细胞群，不同化肌醇，37℃能生长。据此判断菌株为无花果丝孢酵母(Trichospfigucriac)。

无花果丝孢酵母产脂肪酶条件的研究蛋白胨4%，橄榄油0.5%，KH2PO40.1%，MgSO40.1%，(NH4)2SO40.1%，pH5.0。在此基础培养基中加入不同浓度的各种碳源，30'℃，摇瓶发酵48小时，测其酶活性。在0.5%的甜菜糖蜜为碳源时，酶活性最高，相对酶活(以葡萄糖碳源的酶活为100%)为407%。而葡萄糖碳源对产脂肪酶不利，可能是含葡萄糖培养基灭菌后生成了抑制酶形成的物质，或是葡萄糖效应抑制脂肪酶诱导生成的结果。底物类油脂可以作为碳源。

无花果丝孢酵母产脂肪酶性质的研究将无花果丝孢酵母的30℃，48小时振荡培养物离心去菌体后，加入65%饱和度的硫酸铁沉降酶蛋白，离心收集沉降物后，用透析膜透析硫酸铁，再用聚乙二醇包埋法和低温干燥法制取酶粉。对该粗酶制剂进行酶性质的研究。

无花果丝孢酵母产脂肪酶的最适作用温度在25℃-52℃温度范围内测定了酶活性与温度的关系，发现最适作用温度为42℃。

无花果丝孢酵母产脂肪酶的最适作用pH在pH5.0-10.0范围内，测定了酶在不同pH缓冲体系下的活性，较适pH是7.0-9.0，pH8时酶活性最高。

无花果丝孢酵母产脂肪酶的热稳定性将酶分别在蒸馏水和pH6.5的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液中于不同温度下恒温水浴处理15分钟后，测定其残余酶活性，发现一定的温度将使酶失活，而且酶在不同的体系中受热，其耐热性不同2。