[科普中国]-欧式氏杆菌

胡萝卜软腐欧氏杆菌

胡萝卜软腐欧氏杆菌是大白菜包心后期和贮藏期间的主要病害，与霜霉病和病毒病统称为白菜的三大病害，目前软腐病仍然是我国大白菜的主要病害。采后损伤和薄膜包装会造成高湿度，使大白菜更容易腐烂。由于采后大白菜不允许使用农药控制该病害，目前主要采用低温贮藏推迟其腐烂。然而低温成本高，在生产上使用很少。王向阳等采用酸味剂控制大白菜欧氏杆菌获得比较好的效果，特别是醋酸在体外试验中效果很明显。Mills等发现铜离子和铝离子对胡萝卜欧氏杆菌有很好的抑制作用。但是因为毒性问题，难以在采后使用。试验从采后腐烂的大白菜中分离、鉴定致病菌，并在培养基中以及菌液中添加桂醛、戊二醛、稳定态二氧化氯、臭氧、酸性电位水做抑菌试验，以期找到抑菌效果好、在国家允许标准内的采后处理方法，来控制采后大白菜腐烂1。

胡萝卜软腐欧氏杆菌的分离与鉴定挑取烂白菜于无菌的普通液体培养基中，置30℃恒温箱培养48h。用无菌水将培养好的菌种制成悬浮液，挑取菌液在普通肉汁胨培养基上划线培养。将划线后的培养皿放于容量2000mL的干燥器内，放入小段点燃蜡烛于缸内，但不要靠近缸壁，缸盖及缸口涂以凡士林。蜡烛熄灭后放入30℃培养箱中培养，1d后即可出现肉眼可见的菌落，菌落从圆形到不规则形，乳白色，微凸起。然后进行胡萝卜软腐欧氏杆菌的鉴定。

将纯化后的菌落制成无菌水菌悬液，使菌悬液中细菌数达到1.0×10^6cfu/mL，穿刺回接到用100μL/L次氯酸钠进行清洗后的新鲜白菜上，如果白菜上出现相同的症状，则取病害地方进行重新分离，如果分离纯化后的细菌和原来的软腐菌在菌体形态及生理生化特性等方面完全一致，则可确定最初分离到的细菌为胡萝卜软腐欧氏杆菌。

将确认后的胡萝卜软腐欧氏杆菌菌样保存于甘油管中备用。

对胡萝卜软腐欧氏杆菌抑制试验培养基先加一半水，灭菌后，用各处理溶液配足培养基正常含水量。最终浓度为：3μL/L的桂醛，50μL/L的戊二醛，10μL/L的稳定态二氧化氯，10%、20%、30%、40%、50%的酸性电位水。该试验设备产生的酸性电位水ph3，有效氯30～50mg/L。臭氧处理和对照加无菌水配足。取0.5mL菌液于培养基；臭氧处理在添加菌后进行，臭氧浓度为10mL/h，将培养基通臭氧15min。在30℃恒温培养箱中培养48h。记录每皿的菌落数。3次重复。

对菌液的胡萝卜软腐欧氏杆菌抑制的试验菌液中处理浓度：3μL/L的桂醛，50μL/L的戊二醛，10μL/L的稳定态二氧化氯。10%、20%、30%、40%、50%的酸性电位水；另设臭氧处理和对照。均添加0.5mL菌液，臭氧10mL/h，通臭氧15min。所有处理添加菌15min后，倒入培养皿。30℃培养48h。记录每皿的菌落数。3次重复。

臭氧和50%酸性电位水处理时间臭氧和50%酸性电位水是筛选出来最好的处理，用以上2种处理方法分别处理0.5mL菌液1、5、10、15、30min。然后倒入培养皿，30℃培养。设置对照。记录每皿的菌落数。3次重复。

臭氧和50%酸性电位水的保鲜处理大白菜去外叶，选第2层无伤无病叶片，每组3片大白菜叶子。①大白菜叶子分别用50%酸性电位水中浸泡30min，薄膜袋通臭氧15min。自然风干30min；②每叶涂菌，自然风干15min后，再用臭氧和50%酸性电位水分别处理；③用接种环在大白菜上刺洞，每叶刺6个洞，涂菌液，自然风干15min后，再用臭氧和50%酸性电位水分别处理；设置对照（未经任何处理的白菜）。将所有大白菜在室温下（27±3）℃套袋放置5d，每天测定各组大白菜的病斑大小和发病率。4次重复。鉴于大白菜腐烂可能只有1个病斑，也可能有很多个病斑，其差异很大，也为了便于和刺孔大白菜抑菌效果比较，该试验的发病率=（叶病斑数量/6×总叶数量）×100%2。