[科普中国]-粪大肠杆菌测定

简介

总大肠菌群既包括了来源于人类和其他温血动物粪便的粪大肠杆菌，还包括了其他非粪便的杆菌，故不能直接反映水体近期是否受到粪便污染。而粪大肠杆菌能更准确地反映水体受粪便污染的情况，是目前国际上通行的监测水质是否受粪便污染的指示菌，在卫生学上有更重要的意义。

实验目的在测定总大肠菌群的基础上，学会粪大肠杆菌的测定方法。

实验原理粪大肠杆菌在44.5 ℃培养24 h，仍能生长并发酵乳糖产酸产气，是一类粪源性大肠菌群，也称为耐热性大肠菌群，包括埃希氏菌属和克雷伯氏菌属。实验中通过提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件，从而使培养出来的菌主要为来自粪便的大肠埃希氏菌（包括克雷伯氏菌属）1。

测试方法测定粪大肠杆菌的方法与总大肠菌群的方法大致相同，也分多管发酵法和滤膜法两种，区别仅在于培养温度的不同。粪大肠杆菌的检测多在总大肠菌群的检测基础上进行。

多管发酵法（1）器材和培养基

① 器材：所用的器材除包括测定总大肠菌群所用的仪器设备外，还要有精确的恒温培养箱，能确保温度维持在44.5±0.2℃。

② 培养基：

（a）乳糖蛋白胨培养液：制法和成分与总大肠菌群多管发酵法相同。

（b）EC培养液：蛋白胨20.0g，乳糖5.0 g，三号胆盐1.5 g，K2HPO44.0 g，KH2PO41.5 g，NaCI 5.0g，蒸馏水1000mL，灭菌后pH为6.9。

分装于有小倒管的试管中，包装后灭菌，115 ℃（相对蒸汽压力0.072 MPa）。灭菌20 min，取出后置于阴冷处备用。

（2）方法与步骤

① 根据水样污染程度，确定稀释度。

② 按总大肠菌群多管法接种水样。

③ 培养：在37 ℃培养24 h（±2 h），用接种环从产酸、产气或只产酸的发酵管中取一环分别接种于培养液中，置于44.5±0.2 ℃温度下培养（如水浴培养，水面应超过试管内液面）。

④ 结果观察：若产酸产气或产酸不产气，均表示有粪大肠菌群存在，即为阳性。按总大肠菌群多管发酵法结果计算方法，换算成每升的粪大肠菌群数。

滤膜法检测粪大肠菌群的滤膜法有多种，其水样过滤等步骤与总大肠菌群滤膜法相同，仅是培养基、培养时间和培养温度有所不同。此处介绍两种培养温度的M-TEC法。其特异性和准确性均较佳。

（1）器材与培养基

① 器材：所用的器材与测定总大肠菌群所用的仪器设备相同。

② 培养基（M-TEC培养基）：蛋白胨5.0 g，酵母浸膏3.0 g，乳糖10.0 g，K2HPO433 g，KH2PO41.0 g，NaCI 7.5 g，十二烷基硫酸钠0.2 g，脱氧胆酸钠0.1 g，质量浓度16 g/L溴甲酚紫80 mL，溴酚红80 mL，琼脂15 g，蒸馏水1000 mL，pH：7.3。包装后灭菌，115 ℃（相对蒸汽压力0.072 MPa）灭菌20 min，取出后置于阴冷处备用。

（2）方法与步骤

滤膜过滤一定体积的水量后，平置于平板的表面，截菌面向上。先在37 ℃预培养2 h，再移至44.5±0.2 ℃下培养23～24 h，粪大肠菌群菌落呈黄色。必要时将可疑菌落接种于乳糖蛋白胨培养液中培养，观察是否产气，计算出1 L水样中存在的粪大肠菌群数2。