[科普中国]-体细胞检测技术

国内外现有的体细胞检测技术

原理：

PI染色的特异性和稳定性极高，是对细胞核进行染色，而不是整个细胞，细胞技术采用DNA结合PI.计量结果准确。根据荧光显微镜法和特殊的放置样本并连接内置试剂的盒子的使用。

1、体细胞计数的标准方法

体细胞计数的标准方法主要采用显微镜镜检，常用的是将牛奶染色、干燥后在显微镜下计数。具体的方法如下：染色液配方：次甲基兰：1克，90%的乙醇54ml，四氯乙烷：40ml，冰醋酸：60ml。染色步骤：用微量注射器和标准模板将10 ul的样品均匀涂布在1cm2的面积内，在室温下平放，干燥，浸入染色液中3分钟，取出，再次干燥，然后用水冲去多余的染色液，再后干燥。用一放大倍数为300~500倍或更大的显微镜进行计数，计数后折算成体细胞数。

2、荧光显微镜计数法

与标准方法相比，此法采用荧光染色剂。其染色剂配方为吖啶橙0．1%，缓冲液为2%的甲醛和四硼酸钠0.02moI/L，使用前染色液和缓冲液按1：5比例混合。每天随配随用。

3、CMT试验

cMT法的测定原理是基于细胞在遇到表面活性剂时，会收缩的现象，体细胞越多，凝集状态越强，出现的凝集片越多。一般是通过化学试剂NaoH、烷基芳香酸以及溴甲酚紫，使牛奶中的体细胞释放脱氧核糖核酸(DNA)而产生凝集，再根据凝集的现象来判读体细胞数的相对量1。

4、库尔特计数仪测定法

库尔特计数器内设有二个电极，当牛奶中的粒子通过电极狭缝时，由于电阻增加而改变了原来液体的高电导性，阻力增加，电压上升，产生了一个相当子粒子大小的电脉冲。而脉冲的数量则表示了通过狭缝的粒子数量。由于原光已经设定了脉冲的临界水平，所以只有高出该水平的脉冲被自动记录下来，这样仪器就可直接读出每毫升样品的体细胞数。

5、高速体细胞计数仪

主要有丹麦福斯公司的Fossomatic5000系列牛奶体细胞测定仪、荷兰DELTA体细胞计数仪和美国Benuy计数仪。测定原理是基于一些含有荧光原予团的染料能提供具有荧光性能的分子，染料分子被较短波长的可见光或紫外光激发时产生发射光，因此可仪器接收。其工作原理为将被测定的细胞染色并置于悬浮液体之中，然后强迫细胞逐一通过一个非常窄小的缝隙管道。同时，向其发出特殊光束，使得每一个被染色后的细胞在通过测定点时也了出回应光束脉冲信号，采用电子技术，再将其脉冲信号处理，从而达到对体细胞自动计数1。

主要应用牛乳中的体细胞数(Somatic Cell Count,SCC)，是指每毫升奶中的细胞总数。体细胞中多数是白细胞(即巨噬细胞、嗜中性白细胞和淋巴细胞)，约占牛体细胞数的98%～99%，其他1%～2%的体细胞是乳腺组织脱落的上皮细胞。生乳是指从健康奶畜挤下，仅经过冷却、过滤，但未经过任何杀菌处理的常乳。牛乳质量的控制主要是通过监测理化指标和卫生指标来保证的，前者限定了牛乳中各种营养成分的含量，如脂肪、蛋白质、乳糖等，后者对牛乳中可能存在的微生物含量作出了要求，包括SCC和菌落总数(Total Bacteria Count，TBC)。2

体细胞中含有不受欢迎的脂肪酶及血纤维蛋白酶。脂肪酶分解脂肪，产生酸败气味，阻止酸奶乳酸菌繁殖；血纤维蛋白酶减少奶酪的产量，并且即使在冷藏的条件下，这些酶仍然会发挥作用，因此，体细胞数过高，易导致奶制品保质期缩短。另～方面，由于体细胞体积较大，易于藏匿病菌等其他杂菌，因此，体细胞数过高，会严重影响产品杀菌效果。随着体细胞的增多，牛奶的pH值会升高，乳白蛋白会减少，这会导致奶酪产量的减少。20世纪中期以来几乎所有的乳业发达国家都把牛奶体细胞数作为牛奶收购标准之一，在一些欧盟国家规定加工消毒奶的原料奶体细胞数不能超过30万。体细胞过高，乳的成分也会发生变化，脂肪、乳糖和总酪蛋白会减少，而乳清蛋白及钠的含量会明显升高1。