[科普中国]-细菌淀粉酶测定

简介

细菌淀粉酶能将遇碘呈蓝色的淀粉水解为遇碘不显色的糊精，并进一步转化为糖。淀粉水解后，遇碘不再显蓝色。

酶是由生物细胞所产生的，具有催化能力的生物催化剂。生物体内一切化学反应，几乎都是在酶的催化下进行的。微生物的酶按它所在细胞的部位分为胞外酶、胞内酶及表面酶。淀粉酶是指一类能催化、水解淀粉分子中糖苷键的酶的总称，主要包括-淀粉酶、-淀粉酶、糖化酶和异淀粉酶等。1

实验仪器、材料（1）培养皿、试管（1.5 cm ×15 cm）、试管架、接种环；

（2）活性污泥与生活污水混合液；

（3）大肠杆菌、枯草杆菌斜面各一支；

（4）肉膏蛋白胨淀粉琼脂培养基；

（5）0.2%的淀粉溶液、碘液（革兰氏碘液）。

操作步骤细菌淀粉酶在固体培养基中的扩散实验细菌淀粉酶在固体培养基中的扩散实验是利用点种法判断该细菌是否产生淀粉酶。

① 将肉膏胨淀粉培养基加热融化，待冷至50 ℃左右倒入无菌培养皿内（每皿约10 mL），共倒3个，静置待冷凝即成平板。

② 在无菌操作条件下，用接种环分别挑取枯草杆菌、大肠杆菌和活性污泥各一环分别在3个平板上点种5个点，倒置于37 ℃恒温箱内培养24～48 h。

③ 取出平板，分别在3个平板内的菌落周围滴加碘液，观察菌落周围颜色的变化。若在菌落周围有一个无色的透明圈，说明该细菌产生淀粉酶并扩散到基质中，已将培养基中的淀粉水解成了遇碘不显色的物质；若菌落周围为蓝色（无透明圈出现），说明该细菌不产生淀粉酶，培养基中的淀粉遇碘呈蓝色。2

活性污泥和生活污水混合液中淀粉酶的测定① 取4支干净试管，编号0、1、2、3。

② 0号管内加入15 mL蒸馏水（对照管）；1号、2号管中分别加5 mL、10 mL活性污泥与生活污水混合液，再分别加入10 mL、5 mL蒸馏水；3号管内加入15 mL活性污泥与生活污水混合液，即4支试管的总体积都是15mL。

③ 根据样品中淀粉酶的含量，于4支试管中分别加入0.2%的淀粉若干滴（要做预实验以确定其用量），立即摇匀并记下反应的初始时间。接着分别加入几滴碘液，迅速摇匀，此时均呈蓝色。

④ 观察每只试管颜色的变化，准确记下各管蓝色消失时的时间（淀粉被淀粉酶彻底分解的时间）。 3