[科普中国]-肉与肉制品：维生素C含量测定

原理

试样中的维生素C用偏磷酸提取后,经2,6-二氯靛酚氧化成脱氢维生素C,与邻苯二胺反应,生成具有紫蓝色荧光的喹(口恶)啉衍生物。在激发波长350nm,荧光波长430nm处测定其荧光强度。

试剂抗坏血酸标准溶液：1mg/mL

精确称取抗坏血酸50mg,用5%偏磷酸溶液溶解并定容到50mL棕色容量瓶中。测定时再稀释到25μg/mL。

偏磷酸：5%溶液。

乙酸钠(GB 693):50%溶液。

硼酸(GB 628)-乙酸钠溶液。

将3g硼酸溶于50%乙酸钠溶液中并稀释到100mL。

95%乙醇(GB 678):50%溶液。

硫脲：3%溶液。

将3g硫脲溶于50%乙醇溶液中并稀释到100mL(临用前配制)。

盐酸邻苯二胺：0.02%溶液。

2,6-二氯靛酚:0.2%溶液。

仪器与设备实验室常规设备;

荧光分光光度计；

绞肉机:孔径不超过4mm。

试样按GB 9695.19取样;

取有代表性的试样200g,于绞肉机中至少绞两次并使其混匀,在密闭容器中于4℃下贮存备用。

分析步骤提取称取试样2～5g(精确至0.001g)置于烧杯中,加入20mL50%偏磷酸溶液,充分搅拌后,全部移入100mL容量瓶中并定容。混匀后过滤，滤液备用。

测定分别取滤液1mL加入2支试管中,取标准抗坏血酸溶液(25μg/mL)1mL分别加入另外2支试管,向各管中加入2,6-二氯靛酚溶液0.1mL,充分混匀,此时溶液呈微红色,再加入硫脲溶液0.1mL摇匀,使过量的2,6-二氯靛酚还原(粉红色刚刚褪去)。取试样管、标准管各1支分别加入乙酸钠溶液1mL;另2支为空白管,分别加入硼酸—乙酸钠溶液1mL摇匀。在室温下放置15min,分别加入盐酸邻苯二胺溶液5mL摇匀后在暗处放置35min。以激发波长350nm,发射波长430nm,测定生成物的荧光强度。