[科普中国]-保健食品中异嗪皮啶的测定

前言

本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。

本标准负责起草单位:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。

本标准参加起草单位:河北省疾病预防控制中心。

本标准主要起草人:杨大进、方从容、王竹天、常凤启、宋凤英。

本标准为首次发布。

范围本标准规定了保健食品中异嗪皮啶的测定方法。

本标准适用于以刺五加为主要原料的保健食品中异嗪皮啶的测定。

当取样量2.0g，定容至10mL，进样量10μL时，方法的检出限（LOD）为2×10-4g/kg，方法的定量限（LOQ）为6×10-4g/kg，线性范围为2.0μg/mL~40μg/mL。1

原理根据异嗪皮啶易溶于甲醇、乙腈、三氯甲烷的理化特性，试样中异嗪皮啶依次经甲醇和三氯甲烷两种溶液提取，甲醇定容，过滤后进高效液相色谱仪，经反相C18色谱柱分离后，由紫外检测器检测，根据根据保留时间和峰面积进行定性和定量。1

试剂和材料甲醇：优级纯。

乙酸：分析纯。

乙睛：色谱纯。

三氯甲烷：分析纯。

水：为实验室一级用水，电导率（25℃）为0.01mS/m。

异嗪皮啶标准品:纯度≥99%。

异嗪皮啶标准储备液（1.00mg/mL）：准确称量异嗪皮啶标准品0.01g(精确至0.0001g)，置于10mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，混匀（此标准溶液在4℃冰箱中，可保存7d）

异嗪皮啶标准使用液（100μg/mL）：吸取异嗪皮啶标准储备液1.00mL于10mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，混匀（此标准溶液在4℃冰箱中，可保存7d）。1

仪器和设备高效液相色谱仪：附紫外检测器或二极管阵列检测器。

超声波清洗器。

分析步骤试样处理根据试样含量，称取0.5g~5g均匀试样(精确称至0. 001 g)置于25 mL试管中，加人甲醇20 mL,超声波提取20 min后，过滤，用20 mL甲醇分3次洗涤残渣，收集全部滤液，于水浴上蒸干，加适量水溶解并转移到分液漏斗中，用30 mL三氯甲烷分二次萃取，合并三氯甲烷萃取液，于水浴上蒸干，加甲醇溶解并定容至2. 0 mL，过0. 45μm滤膜，滤液备用。1

标准曲线的制备用甲醇稀释标准使用液，配制成异嗪皮啶标准溶液浓度分别为2. 00 μg/mL, 4. 00μg/mL,8.00μg/mL,10.0 μg/mL,20.0 μ.g/mL,40.0μg/mL作为标准系列。

液相色谱参考条件色谱柱:ODS C18柱，250 mm X 4.6 mm，5 μm。

柱温:35℃。

紫外检测器:检测波长343 nm。

流动相:乙睛+0. 1%乙酸溶液=15+85。

流速:1.0 mL/min。

进样量:10μL 。

色谱分析:取标准溶液及试样溶液注人色谱中，以保留时间定性，以试样峰面积或峰高与标准比较定量。1

结果计算试样中异嗪皮啶的含量按式(1)进行计算:1

..................(1)

式中:

X—试样中异嗪皮啶的含量，单位为克每千克(g/kg);

c—由标准曲线求得进样液中异嗪皮啶的浓度，单位为微克每毫升(ug/mL) ;

V—试样定容体积，单位为毫升(mL);

m—试样的质量，单位为克(g) 。

计算结果保留三位有效数字。

精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对值不超过算术平均值的10%。

色谱图在上述色谱条件下的色谱图见图1~图2。1