[科普中国]-肉与肉制品聚磷酸盐测定

原理

用三氯乙酸提取肉和肉制品中的聚磷酸盐，提取液经乙醇、乙醚处理后，在微晶纤维素薄层层析板上分离，通过喷雾显色，检验聚磷酸盐。

试剂如无特别说明，所有试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T 6682的要求。

（1）异丙醇。

（2）硝酸。

（3）四水合钼酸铵溶液（75g/L）：称取75g四水合钼酸铵，用水溶解并定容至1000mL。

（4）氢氧化氨。

（5）酒石酸。

（6）焦亚硫酸钠（150g/L）：称取150g焦亚硫酸钠，用水溶解并定容至1000mL。

（7）亚硫酸钠（200g/L）：称取200g亚硫酸钠，用水溶解并定容至1000mL。

（8）1-氨基-2-奈酚-2-磺酸。

（9）乙酸钠。

（10）三氯乙酸溶液（135g/L）：称取135g三氯乙酸，用水溶解并定容至1000mL。

（11）乙醚。

（12）乙醇（95%）。

（13）可溶性淀粉。

（14）微晶纤维素。

（15）标准参比混合液

在100mL水中溶解下列物质：

磷酸二氢钠：200mg；

焦磷酸四钠：300mg；

三磷酸五钠：200mg；

六偏磷酸钠：200mg。

标准参比混合液在4℃条件下可稳定至少四周。

（16）展开剂：

将140mL异丙醇、40mL三氯乙酸溶液和0.6mL氢氧化铵混合均匀，保存于密封瓶中。

（17）显色剂I：

量取50mL硝酸、50mL四水合钼酸铵溶液，混合均匀，在上述溶液中溶解10g酒石酸（现用现配）。

（18）显色剂II

将195mL焦亚硫酸钠溶液和5mL亚硫酸钠溶液混匀，然后称取0.5g 1-氨基-2-奈酚-2-磺酸溶于上述溶液中，在称取40g乙酸钠溶于与此溶液中，该溶液贮存于密闭的棕色瓶中，可在4℃条件下保存一周。

仪器与设备实验室常规仪器及下列仪器。

（1）机械设备：用于试样的均质。包括：绞肉机、斩拌机等肉类组织粉碎机。

（2）均浆器。

（3）涂布器（涂布厚度0.25mm）。

（4）玻璃板（10×20cm、5×20cm）。

（5）层析缸。

（6）微量注射器。

（7）吹风机（有冷、热风挡）。

（8）喷雾器。

（9）干燥箱

（10）干燥器。

分析步骤试样准备按GB∕T 9695.19取样。，取有代表性的样品不少于200 g。使用适当的机械设备将试样均质。

均质后的试样应尽快分析，若不立即分析，应密封冷藏贮存，防止变质和成分发生变化。存储的试样在启用适应重新混匀。

薄层板的制备将可溶性淀粉0.3g溶于90mL沸水中，冷却后加入15g微晶纤维素粉，用均浆器匀浆1min。用涂布器把浆液涂在玻璃板上，铺成0.25mm的浆层，在室温下自然干燥1h，然后在100℃烘箱中加热10min，取出立即放入干燥器中。也可用商品微晶纤维素板。

提取液的制备将50mL 50℃温水倒入装有50g试样的烧杯中，立即充分搅拌，加入10g三氯乙酸，彻底搅拌均匀。放入冰箱冷却1h后用扇形滤纸过滤。

若滤液浑浊，加入同体积的乙醚并摇匀，用吸管吸去乙醚，再加入同体积的乙醇，振摇1min，静置数分钟后在用扇形滤纸过滤。

薄层层析分离

将适量的展开剂倒入层析缸中，使深度为5-10mm，盖上盖，避光静置30min。

用微量注射器吸取提取液3uL，若经过澄清处理的提取液取6uL，在距薄层板板底约两厘米处点样，每次点样1uL，使点的直径尽量小，边点边用吹风机冷风档吹干。

注：避免使用热风吹干，以防止磷酸盐水解。

用同样的方法，将标准参比液3uL点在同一块板上，距样品点1-2.5cm，距板底距离与样品点一致。

打开层析缸，迅速而小心地把点好样的薄层板放入缸中，盖上盖，在室温下避光展开。

展开到溶剂前沿上升约10cm处，取出薄层板，放入60℃干燥箱中干燥10min，或在室温下干燥30min，或用吹风机冷风档吹干。

磷酸盐的检验将展开过的薄层板垂直立在通风橱中，用喷雾器把显色剂I均匀地喷在薄板上，使之显现出黄斑。

用吹风机吹干薄层板后，放入100℃干燥箱中至少干燥1h，把硝酸全部去除，将薄层板从干燥箱中取出，证实是否有刺鼻的硝酸味道。

薄层板冷却至室温后，放入通风橱中，喷显色剂II，使之呈现出明显的蓝班。

结果将试样斑点与聚磷酸盐标准混合液斑点的比移值相比较，计算其Rf。

正磷酸盐的斑点经常可见.如果样品中含有高浓度的磷酸盐,也可以看见二磷酸盐或聚合磷酸盐的斑点。

参比混合液磷酸盐的Rf值如下：

正磷酸盐：0.70-0.80

焦磷酸盐：0.35-0.50

三磷酸盐：0.20-0.30

六偏磷酸盐：01