[科普中国]-三聚氰胺检测试剂盒

特点

使用三聚氰胺试剂盒通过酶联免疫吸附试验方法测定三聚氰胺的含量时，最后进行结果分析时，通常采用的都是定量分析方法，从而得到每一份牛奶样品中含有三聚氰胺的具体数值，具有较高的准确度和可靠性。

三聚氰胺试剂盒检测是一种敏感性高、特异性强、重复性好的检测方法，具有操作简便、分析速度快、灵敏度高、样品容量大、样品前处理简单、仪器化成本低和分析成本低等优点，是目前最理想的残留筛选性分析方法之一1。

步骤三聚氰胺试剂盒定量测定三聚氰胺残留。先将三聚氰胺酶标记物，样品及标准加入到已经包被有三聚氰胺抗体的微孔中开始反应。在30min的孵育过程中，样品中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争结合微孔中的三聚氰胺 抗体，孵育30min后洗掉小孔中所有没有结合的三聚氰胺及三聚氰胺酶标记物。在配制的洗液清洗结束后，每孔中加入清澈的底物溶液，结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质。孵育30min后加入终止液(盐酸)，终止底物反应，在450nm波长检测吸光度值。根据各孔颜色深浅进行数据读取。依据标准的吸光度值得出样品中三聚氰胺的的浓度值2。

注意事项试剂盒选择在实际检测中发现，一般在试剂盒说明书中列出以下指标：最低检测限；回收率；交叉反应率；标准曲线图谱及数据，标准曲线至少由5个浓度组成；IC50测定值及变形曲线点数目，是比较规范的试剂盒，可以选择。

试剂盒保存试剂盒通常是在2~8℃的条件下保存，不要冷冻，使用前将试剂盒从冰箱中取出于室温条件下回温，待回温至室温后方可使用，试剂盒在室温条件下放置时间最好不要超过24h，所以应将没有使用完的试剂盒及时地放回冰箱中保存，将不用的酶标板微孔条放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。另外，不要使用过了有效日期的试剂盒，也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会导致灵敏度的降低，同样地，不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

检测时注意事项（1）室温及试剂盒的温度条件

室温及试剂盒的温度条件室温最好在25℃左右，试剂盒应提前从冰箱中取出于室温条件下回温，待回温至室温后方可使用。若室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20~25℃)会导致所有标准的吸光值(OD值)偏低。

（2）加样

先加标准品或样本置相对应的微孔中，注意每加一个标准品或样本必须更换吸头；再加入后面的各试剂时，吸头不能靠在板孔壁上，要悬空加入，以防止交叉污染；吸取各试剂或样本时，注意准确性，防止少加、漏加而影响测定结果。

（3）洗板

无洗板机时建议使用多孔加样器或多孔洗涤瓶，观察吸头是否安装牢固，以确保每孔加入的洗涤工作液相同；同样地，加洗涤液时吸头不能靠在板孔壁上，要悬空加入，以防止交叉污染；不要漏洗板孔。整个操作过程不要让板孔干燥，洗板后应立即进行下一步操作，不要中断实验去从事其他事情，因为在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性、重复性不好的现象，所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。此步的操作关系到测定结果的准确度和重复性。

（4）显色

在显色反应过程中，由于板孔中含有两种或两种以上试剂，所以加样完成后需在桌上做圆周运动以混匀，混匀时要注意防止孔内的液体溅出。在加入底物液A和底物液B后，显色了规定的时间后，若颜色较浅，可以适当地延长显色反应时间，但延长时间不得过长，一般不超过10min1。

试剂盒评价一般试剂盒从灵敏度、特异性、准确度、可重复性、检出限、耐变性、批间变异等方面来评价。

李霜等3选取一种市售三聚氰胺ELISA检测试剂盒，评价此试剂盒，结果表明该试剂盒在测试范围内线性回归良好，相关系数R2为0.9864，与三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺、头孢曲松钠、土霉素的交叉反应率均低于0.1%，液态奶和乳粉的基体交叉反应率分别为89.09%和110.86%，液态奶和乳粉的平均回收率分别为102.4%和72.2%，液态奶和乳粉的检测限分别为7.93、20.77μg/L，可以满足国家相关限量标准检测要求。耐变性的变异系数为18%，液态奶和乳粉的批间变异系数分别在11.71%~16.13%和9.13%~13.26%。该试剂盒有较好的准确性、特异性与重复性,耐变性与批间变异均在可接受范围内，可用于液态奶、乳粉样品中的三聚氰胺残留检测。谢体波等4为验证北京勤邦生物技术有限公司生产的三聚氰胺ELISA 检测试剂盒的检测效果。用酶联免疫法对牛奶、奶粉、鸡肉和鸡蛋等4 种样品中三聚氰胺的残留量进行检测，并与高效液相色谱法进行对照。结果表明：该试剂盒对4 种样品的最低检测限分别为19.22、46.86、51.64、21.38 μg/kg，试剂盒板内板间变异系数均小于10%； 对4 种样品做加标回收试验，其回收率均在95%~120%之间，变异系数均小于10%；该方法与高效液相色谱法检测实际样品的阴、阳性判断结果一致。该方法稳定、可靠，可满足食品中三聚氰胺残留快速检测的需要。