必备条件
①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制,且对受体细胞无害,不影响受体细胞正常的生命活动。
②有多个限制酶切点,而且每种酶的切点最好只有一个,如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点,可适于多种限制酶切割的DNA插入。
③含有复制起始位点,能够独立复制;通过复制进行基因扩增,否则可能会使重组DNA丢失。
④有一定的标记基因,便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因,就可以作为筛选的标记基因。一般来说,天然运载体往往不能满足上述要求,因此需要根据不同的目的和需要,对运载体进行人工改建。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。
⑤载体DNA分子大小应合适,以便操作。
食品级载体的选择标记根据采用的选择方法 ,目前用于食品级载体的选择标记主要有细菌营养缺陷性互补标记、糖类利用标记、细菌素抗性/免疫性标记 、金属离子抗性标记、热应激抗性标记、噬菌体抗性标记。
应用意义及发展前景通过食品级载体把有益于人和动物的外源基因,如某些营养物质(必需氨基酸、维生素等)、保健和治病药物( 如抗癌药物 、防衰老药物、各种免疫源和有关的药物蛋白)、生长发育的激素( 如促乳素、生长素等)等基因导入益生菌, 然后制成活菌制剂 ,引入人体和动物体内( 定植或短暂定植), 产生机体所需的外源基因的产物。这种重组基因工程菌, 集菌体本身和有益基因于一体,且省去了一般基因工程菌需要的繁琐的提取工艺 ,为基因工程生产安全、廉价的生物制品开辟了新途径,这对于今后发酵食品工业将是一次全新的革命。因此 ,今后应更多地研究不易突变、选择方便、可操作性强的食品级选择标记 ,为乳酸菌、芽孢杆菌等食品级微生物在功能食品、医疗保健、微生态制剂、化妆品及人工口服疫苗等领域的应用提供基础。1