[科普中国]-酶的交联法固定化技术

常用交联试剂

戊二醛、己二胺、顺丁烯二酸酐、双偶氮苯、异氰酸衍生物等

交联法种类酶交联法是向酶液中加入交联试剂，在一定条件下使任意酶分子之间发生交联而形成固定化酶的方法。酶交联法的酶固定过程与酶浓度、pH 值、离子浓度、温度及反应时间有关，但酶在交联过程中容易失活。

实例：0.2%木瓜蛋白酶和0.3%戊二醛在pH 值为5.2~7.2，0℃，24h即可实现交联1。

惰性蛋白交联法是酶与惰性蛋白在交联剂的作用下发生交联的方法。其机械强度优于酶交联法。将酶蛋白和惰性蛋白交联后，可减少目的酶活力的降低。

实例：惰性蛋白可用胶原或动物血清白蛋白等。此法可制成酶膜或在混合后经低温处理及预热制成泡沫状共聚物，也可制成多孔性颗粒1。

载体交联法是同一多功能试剂一部分化学集团与载体偶联，而另一部分集团与酶分子偶联的方法。该方法可以使载体和酶牢固结合，并且可以长时间使用，但其缺点在于交联过程中酶容易失活。

实例：葡萄糖氧化酶、丁烯-3、4-氧化物和丙烯酰胺共聚即可得稳定的固定化葡萄糖氧化酶。

交联过程交联法是用多功能试剂进行酶蛋白之间的交联，使酶分子和多功能试剂之间形成共价键，得到三向的交联网架结构，除了酶分子之间发生交联外，还存在着一定的分子内交联。根据使用条件和添加材料的不同，可产生不同物理性质的固定化酶。其交联过程可分为：

（1）交联剂与酶直接作用

（2）酶吸附在载体表面上再经受交联

（3）多功能团试剂与载体反应得到有功能团的载体，再连接酶。

技术优点（1）良好的热稳定性和贮藏性

（2）良好的操作及保存稳定性

（3）良好的催化活性

技术缺点有的方法固定化操作较复杂，进行化学修饰时易造成酶失活。交联剂一般价格昂贵，此法也很少单独使用，科研工作者一般都将其作为其他固定化方法的辅助手段，以达到更好的固定效果。2