[科普中国]-胆绿素

简介

胆绿素又名去氢胆红素。一种胆汁色素。存在于胆汁及黄胆尿中。暗绿色片状或柱状晶体。约300℃变黑，分解而不熔化，无熔点。溶于甲醇、乙醚、氯仿、二硫化碳、苯，难溶于水。可由胆红素氧化而得。用于生化研究。

具体结构见图1。

胆红素与胆绿素一般认为胆绿素是血红素主要的终末代谢产物，也是家禽主要的胆汁色素。鸡和火鸡是以胆绿素钠盐的形式排入到胆汁中去的。禽类缺乏将胆绿索还原成胆红素所必需的胆绿素还原酶，因此在禽类总胆汁色素中，胆红素所占的百分数很低。

在正常禽类血清或血浆中，几乎没有或只有很少的胆红素或胆绿素。有人研究发现，鸡的胆红素和胆绿素在胆囊中浓度几乎相同，但在肝脏胆管的胆汁中，胆红素则比胆绿素多75%。当结扎一侧肝脏的胆管后，无高胆绿素血症而有轻度高胆红素血症；当结扎两侧胆管后，则有痕量胆绿素血症及明显高胆红素血症。禽类的胆汁胆红素很类似于犬的双葡萄糖酸胆红素(bilirubin diglucoride)，这一研究说明，对鸡而言无论是肝外形成的胆绿素或是肝内胆管形成的胆绿素，均在肝外胆道系统中被还原成胆红素。

食肉禽类血清胆红素升高可发生在胆道阻塞或血管内溶血性疾病，而鹦鹉类临床上出现黄疸则极为罕见，因此，如用血清胆红素的测定法来检查鹦鹉类肝脏疾病，则其意义不大，具有肝脏疾病的或处于饥饿状态下的鹦鹉类血清，常呈现绿色，并含有尿酸盐，这种情况的出现通常是由于存在高胆绿素血症和高胆绿色尿症所致。偶尔也见有罹患慢性肝病的鹦鹉类呈现黄疸，这可能是由于胆绿素非特异性地还原成胆红素所致。如正常鸟类其血清呈现黄色，则认为这与胆红色无关，而是食物中胡萝卜色素引起的1。

胆绿素的代谢途径血红素氧合酶(Heme Oxygenase，HO)是血红素降解的限速酶，能将血红素转变为胆绿素，CO和铁，胆绿素随即被还原为胆红素，己知HO有3种同工酶，HO-1，HO-2，HO-3。HO-2和HO-3呈组成型大量表达，它们可能为正常细胞内的血红素结合而分别发挥其功能。而HO-1属诱导型，广泛分布于哺乳动物多种组织细胞中;HO-1可由多种刺激因子诱导表达，如氧化应激、热休克、紫外线照射、缺血再灌注、重金属、细菌脂多糖、细胞因子和NO及其底物血红素等。最近的研究重点己集中在此酶促反应产物(胆绿素，CO和铁)的生物学效应上，它们具有抗氧化、抗炎、抗凋亡、信号传导和免疫调节及抑制黏附分子表达活性等作用。

HO-1对各种刺激的强大适应性反应表明其可能在阻止炎症反应和氧化性组织损伤中具有重要的作用。胆绿素，作为HO-1酶促反应产物之一，属于三甲川胆色素的一种胆汁色素，为深绿色的色素体，是胆红素的前体，只存在于鸟类、两栖动物或食草动物的胆汁中、正常人的胆汁及血清中不存在。近年来，在其他疾病动物实验中己有许多关于胆绿素与HO-1相关性的研究，但其结果各不相同。有的研究发现胆绿素能够反作用于HO-1，通过负反馈调节抑制HO-1的表达生成，但也有研究发现它对HO-1的表达变并没有显著影响。大量研究证实HO-1对脑缺血再灌注损伤具有抗氧化，抗炎，抗调亡的神经保护效应同时，越来越多的动物实验研究表明胆绿素具有强效的抗炎作用，它不仅能抑制由脂多糖诱导所致的炎症反应，保护大鼠的急性肺损伤，也能通过减少炎症介质的生成和释放抑制腺毒血症的恶化发展，还能抑制巨噬细胞内Toll样受体-4的表达和炎症因子的生成而产生强效的抗炎作用。另外，外源性给予胆绿素能下调黏附分子的表达而抑制白细胞的聚集，从而减少细胞因子和趋化因子的生成或者抑制促炎蛋白如环氧合酶-2和细胞色素P450等的生成，最终抑制炎症反应。

近年来，胆绿素应用于各种疾病的保护，如血管损伤，器官移植的报道越来越多，其作用机制主要是与抗炎效应相关。它在许多疾病发生发展过程中能发挥抗炎作用，通过抑制炎症反应来减缓或改善疾病的恶化发展或预后，但其应用于脑缺血再灌注损伤的保护研究几乎没有报道2。

血清胆绿素血清胆绿素系血红蛋白与胆红素的中间物。Lemberg氏谓完整的肝功能及充足的营养，为胆绿素转变成胆红素所必需。胆绿素亦可由胆红素氧化而成，尤其是胆红素在肝及胆道停滞后。此时血中出现胆绿素，可能由于反流所致。胆绿素使皮肤变绿色。当含有胆绿素时，皮内注射小量0.1%正铁氰酸钾溶液，可引起蓝绿色。胆绿素不呈Van denBergh氏反应，系由特殊分光光度计法测定。通常血清胆红素与胆绿素量是平行的，惟溶血性黄疸时则无胆绿素。在完全性肝外胆道阻塞时，胆绿素浓度特别高，皮肤呈绿色。营养状态的改善，似可降低血清胆绿素浓度。

使胆绿素转变为胆红素的生产工艺胆红素氧化后的主要产物为胆绿素，通过调整工艺使之再转变为胆红素，可提高胆红素收率。

本法提取胆红素，收率以新鲜猪胆汁计可达0.045%。

1、操作方法

(1)制取胆钙盐

取新鲜猪胆汁，过滤后，边搅拌边加饱和石灰水至pH=13~14。然后迅速加热，40℃左右时，除去泡沫及脂类等杂质，95℃时恒温15分钟，勿煮沸，过滤得胆钙盐。

滤液作回收粗结合型猪胆汁酸用，胆钙盐即刻酸化。

对饱和石灰水的要求同以上各法的要求。

(2)酸化

加10倍量的蒸馏水于钙盐中，再加2.0%NaHSO3，研成糊状。在20℃以下，边搅拌边滴加1：1的盐酸溶液(盐酸：冰=1：1)，至pH=1~1.5。

酸化时，开始加酸的速度可稍快，再逐渐变慢。酸化不砌底，易形成团块，要注意防止。

酸化接近终点时，较粗稠，为防止酸化不彻底，可研磨过筛，再继续进行酸化。

(3)乙醇处理

在室温下，加10倍量的乙醇于酸化后的胆色素中，搅匀，调pH为3。加0.5%NaHSO3，拌匀后，置低温、黑暗处分层。

同样条件，再处理一次后抽千。

注意，粘稠的胆色素宜研磨，分散均匀，使乙醇接触充分。pH不得高于4。

(4)水洗

将胆色素置于10倍量80℃热水中搅匀，保温10分钟，收集漂浮的胆红素，用乙醇脱水。

(5)氯仿提取

脱水后的胆色素，加0.5%的NaHSO3，于60℃用氯仿回流提取至提取液无色(少量氯仿，多次提取，效果好)。

(6)蒸馏回收氯仿，收取精制胆红素

减压蒸馏氯仿提取液至少量，冷至室温后加1%NaHSO3和无水乙醇，调pH为酸性，置予4℃、黑暗处12小时以上，使胆红素结晶析出。

收集结晶胆红素，用热蒸馏水洗涤，再用乙醚冲洗，真空干燥后即得胆红素精品。

2、胆绿素转变为胆红素的条件 。

①需加抗氧剂，

②pH为酸性，

⑧黑暗处低温放置12小时以上。

有了上述三个条件的保证，部分胆绿素便可再转变为胆红素3。