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[科普中国]-伴刀豆凝集素A

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结构性质

它是四聚体球蛋白,分子量102,000。每个亚基含237个氨基酸残基,分子量25,500,结合一个Ca2+和一个Mn2+,含一个糖结合部位。能与α-甘露糖、α-葡萄糖(细胞膜糖蛋白上)专一地结合,结合位点要求是α-D-吡喃甘露糖或α-D吡喃葡萄糖六元环中的C-3/C-4和C-6未被取代羟基,与以α-1,2糖苷键连接的甘露二糖和甘露三糖有最大的亲和力1。

功能特征血型特异性:对唾液酸苷酶处理的红细胞无特异性。

凝集活性:对唾液酸苷酶处理的红细胞产生肉眼可见的凝集需0.5~10μg/ml。

糖抑制:α-甲基-甘露糖苷>α-D-甘露糖>α-D葡萄糖>α-N-乙酰葡萄糖胺

提取分离方法以新鲜刀豆种子为原料,提取刀豆中凝集素的最佳溶剂是甲酸溶液,凝集素提取的最优工艺条件为:提取温度为22℃、提取时间为2.5h、甲酸溶液中NaCl 浓度为0.20mol/L、甲酸浓度为0.7mol/L、料液比为1:50(W/V)。提取所得刀豆凝集素活力为102.96HU/g、蛋白质提取量为11.15mg/g。凝集素提取液经硫酸铵分级沉淀、透析等处理后得到刀豆凝集素(SJL)粗品。经HPLC 分析表明,刀豆凝集初步分离产物的组分较为复杂,有多种不同分子量的蛋白质构成,分子量分布范围较广,从150000D到1300D左右。分子量为71000D左右的组分占22.65%,分子量为36000D左右的组分占15.55%。这说明初步分离产物中刀豆凝集素的含量较高。2

应用方向Con A具有广阔的适用性,是一种重要的生化和免疫研究试剂。

Con A能沉淀多种糖类,葡聚糖和果聚糖等很多其它多糖,以及免疫球蛋白和血型物质等多种糖蛋白,还沉淀肺炎球菌多糖,并能凝集多种红细胞。Con A能和很多细菌和动物细胞反应,能区分某些正常和肿瘤细胞,能促进细胞分裂(促有丝分裂作用)。Con A被用来刺激T细胞产生IL 1样因子,还用于脾细胞增生,研究激活所必需的配体/受体作用。利用免疫组化技术,Con A可用于病理标本中的组织细胞的巨噬细胞展示,区分正常分泌ACTH的垂体细胞和分泌ACTH的腺肿瘤细胞。Con A加强谷氨酸盐神经递质受体的反应,已被用于研究糖基化在离子通道调节中的作用。以Con A为配基的亲和层析介质广泛用于糖蛋白的分离纯化和多糖、糖蛋白糖链结构的研究。

稳定性由酸碱稳定性试验可知,在极端pH 值条件下,ConA产生不可逆变性,活力丧失。因此,在今后进行刀豆凝集素的灭活方面研究时,可采用稀碱溶液浸提,并控制一定的pH值,从而灭活大部分的ConA活力1。