[科普中国]-肉与肉制品维生素PP含量测定

原理

维生素PP经氢氧化钙溶液提取，与溴化氰结合，在对氨基苯乙酮作用下，生成黄色化合物，在420mm波长处测定吸光度，标准曲线法定量。

试剂和材料如无特别说明，所有世纪均为分析纯。

（1）水：符合GB/T 6682-2008规定的三级水。

（2）乙醇。

（3）戊醇。

（4）盐酸溶液（6mol/L）：量取25mL盐酸（ρ20≈1。19g/mL），用水稀释至50mL。

（5）硫酸溶液（5mol/L）：量取13。5mL盐酸（ρ20≈1。84g/mL），用水稀释至50mL。

（6）硫酸溶液（1 mol/L）：量取13。5mL盐酸（ρ20≈1。84g/mL），用水稀释至50mL。

（7）氢氧化钙溶液（1 mol/L）：称取3。7g氢氧化钙，用水溶解并稀释至50mL。

（8）硫酸锌饱和溶液：称取12g硫酸锌，在室温下用水溶解并稀释至20mL，如有沉淀需过滤。

（9）氢氧化钠溶液(3 mol/L)：称取6g氢氧化钠，用水溶解并稀释至50mL。

（10）氢氧化钠溶液(1mol/L)：称取2g氢氧化钠，用水溶解并稀释至50mL。

（11）10%溴化氰溶液：称取2g溴化氰，用水溶解并稀释至20mL。

注：溴化氰是剧毒试剂，应戴上手套在通风橱里配制。

（12）2%对氨基苯乙酮溶液：称取对氨基苯乙酮1g，用少量盐酸溶解，用水稀释至50mL。

（13）酚酞指示剂（10g/mL）：称取0。5g酚酞，用乙醇溶解并稀释至50mL。

（14）烟酸标准储备液（1mg/mL）：称取已干燥恒重并贮存于五氧化二磷干燥器中的烟酸标准品0。1g（准确至0。001g），用5mol/L硫酸1mL溶解，转移至100mL容量瓶中，定容。在℃冰箱内保存。

（15）烟酸标准工作液：吸取烟酸标准储备液0。25mL、0。50mL、1。00mL、2。00mL、2。50mL，分别置于100mL容量瓶中，用水定容，混匀。此标准工作液系列中烟酸的浓度分别为2。5ug/mL、5ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、25ug/mL。

仪器与设备实验室常规仪器及下列仪器。

（1）机械设备：用于试样的均质化，包括高速旋转的切割机，或多孔板的孔径不超过4mm的绞肉机。

（2）恒温水浴。

（3）分光光度计。

（4）分析天平：可准确称重至±0。001g。

取样实验室所收到的样品应具有代表性且在运输和储藏过程中无受损或发生变化。

取样方法参见GB∕T 9695.19。

取有代表性的样品200 g。

试样制备使用适当的机械设备将试样均质。注意避免试样的温度超过25℃。若使用绞肉机，试样至少通过该设备两次。

将试样装入密封的容器里，防止变质和成分变化。试样应在均质化后24 h内尽快分析。

分析步骤提取称取试样2g(精确到0。001g)于三角瓶中，加1mol/L氢氧化钙溶液10mL，水40mL，混匀后，在沸水浴上提取90min，冷却后移入100mL（V1）容量瓶中，定容。混匀过滤，滤液备用。

中和吸取滤液25。00mL（V2）于50mL（V3）容量瓶中，加酚酞指示剂两滴，用6mol/L盐酸中和至红色刚刚退去。加入饱和硫酸锌溶液2mL及几滴戊醇，用3mol/L和1mol/L氢氧化钠溶液调至粉红色。滴加1 mol/L硫酸溶液，使粉红色刚好褪去，用水定容，混匀，放置10 min后过滤，滤液备用。

测定分别吸取烟酸标准工作液1。00mL（V4）于具塞试管中，加水4 mL，吸取试样液5。00mL（V5）于具塞试管中。于上述各试管中加入10%溴化氰溶液2 mL摇匀。置60～70℃水浴中保温15min后，迅速冷却。加入2%对氨基苯乙酮溶液1 mL，摇匀，在暗处放置15min。在420nm波长处测定吸光度。

标准曲线的绘制以标准工作液的浓度为横坐标，相应的吸光值为纵坐标绘制标准曲线。

计算试样中维生素PP的含量按下式计算：

式中：

X——试样中维生素PP含量，mg/kg；

c——从标准曲线上查得待测试样溶液中维生素PP的浓度，ug/mL；

V3——试样溶液第二次定容的体积，mL；

V1——试样溶液第一次定容的体积，mL；

V4——显色用标准工作液的体积，mL；

m——试样质量，g；

V2——中和用试样溶液的体积，mL；

V5——显色用试样溶液的体积，mL；

结果保留至小数点后一位。1