[科普中国]-肉与肉制品：维生素B1含量测定

主题内容与适用范围

本标准规定了肉与肉制品中维生素 B1含量的测定方法。本标准适用于肉与肉制品中维生素 B1含量的测定。

引用标准GB 9695.1 肉与肉制品 取样方法

原理试样用酸水解使维生素 B1（硫胺素）游离，维生素B1经酶解、纯化后在碱性高铁氰化钾作用下定量氧化成具有蓝色荧光的硫色素。在激发波长 365nm，发射波长 435nm处测定其荧光强度，荧光强度与硫色素含量成正比，以此计算维生素 B1的含量。

试剂所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或同等纯度的水。

乙酸钠（GB 694）：2 mol/L溶液。

盐酸（GB 622）：0.1 mol/L溶液。

溴甲酚绿pH 指示剂：变色范围：pH 值为4.0（绿）~5.8（蓝）。0.1g 指示剂与0.05mol/L 氢氧化钠溶液 2.8mL在玛瑙乳钵中研磨溶解，以水稀至 200mL。

溴酚蓝 pH指示剂：变色范围：pH值为 3.0（黄）~ 4.6（蓝）。0.1g指示剂与 0.05mol/L

氢氧化钠溶液 3mL在玛瑙乳钵中研磨溶解，以水稀至 250mL。

高峰淀粉酶：10%溶液。

氯化钾（GB 646）：25%溶液。

酸性氯化钾溶液：每升氯化钾溶液中加入 8.5mL浓盐酸。

氢氧化钠（GB 629）：15%溶液。

铁氰化钾（GB 644）：1%溶液。

氧化剂：1%铁氰化钾溶液1mL，用15%氢氧化钠溶液稀释至100L。临用前配制。

异丁醇。

95%乙醇（GB 679）：20%溶液。

酸性乙醇：20%乙醇溶液用0.1mol/L 盐酸溶液调节pH 为3.4~4.3。4．14 人造沸石：市售品要经活化处理

活化方法：将粒度 40~60目的人造沸石置于烧杯中，加约 5倍量的热水搅拌，静置后倾出上清液弃去。重复此操作，直至上清液透明。接着加入 5倍量的 3%乙酸溶液搅拌浸泡10min，静置后倾去上清液，重复此操作3 次。然后加入约5 倍量热的酸性氯化钾溶液，在沸水浴中加热 25min，弃去上清液，加 3%乙酸溶液洗涤两次后，用水反复洗至无氯离子为止（用硝酸银溶液检查）。将处理好的人造沸石浸没于水中保存，也可于 80℃备用。维生素 B1回收率要大于85%。

维生素 B1标准溶液

标准贮备液 100μg/mL：

称取 50.0mg维生素 B1标准品于 500mL棕色容量瓶中，用酸性乙醇稀释至刻度，置冰箱保存。

标准工作液 10μg/mL：

取标准贮备液 10.0mL，用酸性乙醇定容至 100mL棕色容量瓶中。

仪器和设备

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层析柱可控制流速为 1mL/min。准备方法：将脱脂棉置于毛细管顶端防止沸石流出和控制溶液流速。把悬浮于水中的人造沸石倾入层析柱中，其高度约 10cm（约用 1.5g人造沸石）仔细洗下贮液槽壁上的人造沸石颗粒。在吸附过程中液面要始终高于沸石表面，防止柱内有气泡。

高压釜。

试样按 GB 9695.19取样。

取有代表性的试样200g，于绞肉机中至少两次使其混匀，贮于密闭器中备用。尽快分析试样。

分析步骤水解称取 4~6g试样（精确至 0.001g）（约含维生素 B110~25μg）于 150mL具塞锥形瓶中，加入 0.1mol盐酸溶液 50mL，搅匀，于沸水浴中水解 30min。取出冷却至室温。

酶解用乙酸钠溶液调节试样水解液，使 pH为 4.0~4.5，用溴甲酚绿指示剂在点滴板上检查。加入高峰淀粉酶溶液 5mL，混匀，在 45~50℃培养箱中保温 3h。取出冷却后 0.1mol/L盐酸调整 pH为 3.5左右，用溴酚蓝指示剂在点滴板上检查。将溶液全部转移到 100mL容量瓶中，用水稀释至刻度。摇匀，用滤纸过滤，取滤液备用。

净化取酶解滤液 25.0mL，注入人造沸石层析柱，层析柱流速控制在 1mL/min左右，弃去流出液。用 3份 5mL近沸热水洗涤层析柱，弃去流出液。用 25mL60~80℃热的酸性氯化钾溶液分 5次洗脱维生素 B1，收集于 25mL容量瓶中，冷却后用酸性氯化钾溶液定容。混匀备用。

氧化取 2支 40mL具塞棕色试管，加入 1.5g氯化钾或氯化钠。再加入净化后的样液 5.0mL，一支试管中加入氧化剂 3mL，立即旋摇试管，混匀，加入异丁醇 10mL萃取，塞上塞子振摇 90s。静置分层。另一支试管作为空白对照，加入 15%氢氧化钠溶液 3mL，旋摇混匀，加入异丁醇 10mL萃取，静置分层，异丁醇层用无水硫酸钠脱水。

荧光测定准备好荧光分光光度计，调节激光波长为 365nm，发射波长为 435nm，狭缝为 5mm，取异丁醇萃取液，置于比色皿中，测定氧化样品管中的荧光强度为 I，空白样品管中的荧光强度为 I0。

维生素 B1标准的测定取维生素 B1标准工作液 2.0mL，于 150mL具塞锥形瓶中，同样按 7.1~7.5条操作步骤进行水解、酶解、净化、氧化、测定。氧化标准管中荧光强度为 Q，空白标准管中荧光强度为 Q0。2

分析结果的计算计算公式X = （I −I0）/(Q −Q0) * 20/m

式中：X——试样维生素 B1的含量，mg/kg；I——氧化样品管中的异丁醇液的荧光强度；I0——空白样品管中的异丁醇溶液的荧光强度；Q——氧化标准管中的异丁醇溶液的荧光强度；Q0——空白标准管中的异丁醇溶液的荧光强度；m——试样质量，g。

当符合允许差规定的要求时，取两次测定结果的算术平均值作为结果。

允许差由同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过其算术平均值的 20%。