[科普中国]-重组人白介素2

重组人白介-素2(rhIL-2)是基因重组产品, 是一种非糖基化蛋白，生物活性与天然IL-2 相同，含有133个氨基酸残基,相对分子质量为15·5 k,其药理作用在于增强免疫应答。重组人IL-2。1992年在美国经FDA 批准上市，商品名为 Proleukin。 此后相继在日本、丹麦等国家上市，批准的临床应用适应证为肾癌、血管肉瘤和黑色素瘤。1

药典标准定义、组成及用途本品系由高效表达人白细胞介素-2（简称人白介素-2）的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白介素-2制成。合适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。2

基本要求生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。2

制造1工程菌菌种2

1.1 名称及来源2

重组人白介素-2工程菌株系由带有人白介素-2基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。

1.2 种子批的建立2

应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。

1.3 菌种检定2

主种子批与工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。

1.3.1 划种LB琼脂平板

应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长。

1.3.2 染色镜检

应为典型的革兰氏阴性杆菌。

1.3.3 对抗生素的抗性

应与原始菌种相符。

1.3.4 电镜检查（工作种子批可以免做）

应为典型大肠杆菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。

1.3.5 生化反应

应符合大肠杆菌生化反应特性。

1.3.6 人白介素-2表达量

在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。

1.3.7 质粒检查

该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒的相符。

1.3.8 目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做）

目的基因核苷酸序列应与批准的序列相符。

2原液2

2.1 种子液制备

将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养。

2.2 发酵用培养基

采用适宜的不含抗生素的培养基。

2.3 种子液接种及发酵培养

2.2.3.1 在灭菌培养基中接种适量种子液。

2.2.3.2 在适宜的温度下进行发酵，应根据经批准的发酵工艺进行，并确定相应的发酵条件，如温度、pH值、溶解氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查（2010年版药典三部附录ⅨG）。

2.4 发酵液处理

用适宜的方法收集、处理菌体。

2.5 初步纯化

采用经批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。

2.6 高度纯化

经初步纯化后，采用经批准的纯化工艺进行高度纯化，使其达到3.1项要求，即为重组人白介紊-2原液。加入适宜稳定剂，除菌过滤后于适宜温度下保存，并规定其有效期。

2.7 原液检定

按3.1项进行。

3半成品2

3.1 配制与除菌

3.1.1 稀释液配制

按经批准的配方配制稀释液。配制后应立即用于稀释。

3.1.2 稀释与除菌

将检定合格加稳定剂的重组人白介素-2原液用2.3.1.1项稀释液稀释至所需浓度。除菌过滤后即为半成品，保存于2～8℃。

3.2 半成品检定

按3.2项进行。

4成品2

4.1 分批

应符合“生物制品分批规程”规定。

4.2 分装

应符合“生物制品分装和冻干规程”及2010年版药典三部附录ⅠA有关规定。

4.3 规格

应为经批准的规格。

4.4 包装

应符合“生物制品包装规程”及2010年版药典三部附录Ⅰ A有关规定。

检定1原液检定2

1.1 生物学活性

依法测定（2010年版药典三部附录ⅩD）。

1.2 蛋白质含量

依法测定（2010年版药典三部附录ⅥB第二法）。

1.3 比活性

为生物学活性与蛋白质含量之比，每1mg蛋白质应不低于1.0×10IU。

1.4 纯度

1.4.1 电泳法

依法测定（2010年版药典三部附录ⅣC）。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于10μg（考马斯亮蓝R250染色法）或5μg（银染法）。经扫描仪扫描，纯度应不低于95.0%。

1.4.2 高效液相色谱法

依法测定（2010年版药典三部附录ⅢB）。色谱柱以适合分离分子质量为5～60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂；流动相为0.1mol/L磷酸盐－0.1mol/L氯化钠缓冲液，pH7.0（含适宜的表面活性剂）；上样量应不低于20μg，在波长280nm处检测，以人白介素-2色谱峰汁算的理论板数应不低于1500。按面积归一化法计算，人白介素-2主峰面积应不低于总面积的95.0%。

1.5 分子量

依法测定（2010年版药典三部附录Ⅳ C）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于1.0μg，制品的分子质量应为15.5kD±1.6kD。

1.6 外源性DNA残留量

每1次人用剂量应不高于10ng（2010年版药典三部附录Ⅸ B）。

1.7 宿主菌蛋白质残留量

应不高于蛋白质总量的0.10%（2010年版药典三部附录Ⅸ C）。

1.8 残余抗生素活性

依法测定（2010年版药典三部附录Ⅸ A），不应有残余氨苄西林或其他抗生素活性。如制品中含有SDS．应将SDS浓度至少稀释至0.01%再进行测定。

1.9 细菌内毒素检查

每100万IU应小于10EU（2010年版药典三部附录ⅫE凝胶限度试验）。如制品中含有SDS，应将SDS浓度至少稀释至0.0025%再进行测定。

1.10 等电点

主区带应为6.5～7.5，且供试品的等电点图谱应与对照品的一致（2010年版药典三部附录Ⅳ D）。

1.11 紫外光谱

用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至约100～500μg/ml，在光路1cm、波长230～360nm下进行扫描，最大吸收峰波长应为277nm±3nm（2010年版药典三部附录ⅡA）。

1.12 肽图

依法测定（2010年版药典三部附录ⅧE），应与对照品图形一致。

1.13 N端氨基酸序列（至少每年测定1次）

用氨基酸序列分析仪测定，N端序列应为：

（Met）-Ala-Pro-Thr-Ser-Ser-Ser-Thr-Lys-Lys-Thr-Gln-Leu-Gln-Leu-Glu。

2半成品检定2

2.1 细菌内毒素检查

每100万IU应小于10EU（2010年版药典三部附录Ⅻ E凝胶限度试验）。如制品中含有SDS，应将SDS浓度至少稀释至0.0025%再进行测定。

2.2 无菌检查

依法检查（2010年版药典三部附录Ⅻ A），应符合规定。

3成品检定2

3.1 鉴别试验

按免疫印迹法（2010年版药典三部附录Ⅷ A）或免疫斑点法（2010年版药典三部附录Ⅷ B）测定，应为阳性。

3.2 物理检查

3.2.1 外观

应为无色或微黄色澄明液体。

3.2.2 可见异物

依法检查（2010年版药典三部附录ⅤB），应符合规定。

3.2.3 装量

依法检查（2010年版药典三部附录Ⅰ A）．应不低于标示量。

3.3 化学检定

3.3.1 pH值

应为3.5～4.5（2010年版药典三部附录Ⅴ A）。

3.3.2 渗透压摩尔浓度

依法测定（2010年版药典三部附录Ⅴ H），应符合批准的要求。

3.4 生物学活性

应为标示量的80%～150%（2010年版药典三部附录Ⅹ D）。

3.5 残余抗生素活性

依法测定（2010年版药典三部附录Ⅸ A），不应有残余氨苄西林或其他抗生素活性。如制品中含有SDS，应将SDS浓度至少稀释至0.01%再进行测定。

3.6 无菌检查

依法检查（2010年版药典三部附录Ⅻ A），应符合规定。

3.7 细菌内毒素检查

每1支应小于10EU（2010年版药典三部附录Ⅻ E凝胶限度试验）。如制品中含有SDS，应将SDS浓度至少稀释至0.0025%再进行测定。

3.8 异常毒性试验

依法检查（2010年版药典三部附录Ⅻ F小鼠试验法），应符合规定。

3.9 残余乙腈含量

如工艺中采用乙腈，则照气相色谱法（2010年版药典三部附录Ⅲ C）进行。色谱柱采用石英毛细管柱，柱温45℃，气化室温度150℃，检测器温度300℃，载气为氮气，流速为每分钟4.0ml，用水稀释乙腈标准溶液使其浓度为0.0004%，分别吸取1.0ml上述标准溶液及供试品溶液顶空进样400μl，通过比较标准溶液和供试品溶液的峰面积判定供试品溶液乙腈含量。乙腈含量不高于0.0004%。

药理作用白介素-23(Interleukin-2,IL-2)是辅助型T淋巴细胞(TH)活化产生的细胞因子[1-2]。IL-2具有双重调控免疫应变的能力,可有效诱导细胞免疫和体液免疫应答。重组人白介-素2(rhIL-2)是基因重组产品,含有133个氨基酸残基,相对分子质量为15·5 k,其药理作用在于增强免疫应答。

阿地白介素4（IL-2)的主要生理作用是刺激和维持T细胞的分化增殖。IL-2有关肿瘤的生物学活性包括：1.刺激自然杀伤(NK)细胞的增殖和活化，并增强其活性。2.诱导细胞毒性淋巴细胞，增强其溶细胞活性。3.诱导淋巴因子活化杀伤(LAK)细胞。LAK细胞具有广谱的抗肿瘤活性，可以溶解多种肿瘤细胞。IL-2不仅是产生LAK细胞的必需淋巴因子，而且在它的存在下还能维持LAK细胞的增殖和长期生长，因此，在临床抗肿瘤治疗时往往把IL-2和LAK细胞同时给予，这就是恶性肿瘤的过继免疫性治疗(adoptiveimmunetherapy，AIT)。4.刺激肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的增生并增强其活性。动物实验证明，TIL较LAK细胞的抗肿瘤活性高50～100倍。5.不仅能促进T细胞增殖，且对细胞有促增殖和促分化作用。在肿瘤治疗的动物模型中已证明，当T细胞中介抗瘤反应强烈时，很低量的IL-2已足以激化抗瘤作用；但当T细胞中介的抗瘤反应很弱时，则需要很高剂量的IL-2。低剂量可以显著地刺激T细胞，而激活NK及LAK细胞则要求很大剂量。因IL-2不能直接抗癌，用药目的是最大限度地兴奋免疫机制，以加强抗癌作用。以前常用的IL-2和LAK细胞联合应用治疗恶性肿瘤，现已不再推荐，而代之以IL-2与肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)联合疗法(过继疗法adoptive therapy)。6.rhIL-11为177个氨基酸组成的活性蛋白质。其编码基因位于19号染色体长臂13区。作用于巨核细胞系较晚期阶段的巨核细胞水平，促进巨核细胞的增殖及成熟，并促进血小板的产生。IL-11虽无巨核细胞集落刺激因子(Meg-CSF)的活性，但有巨核细胞增殖因子的活性，与GM-CSF及IL-3协同作用，可使CFU-MegDNA量增多。

药代动力学：本品在体内主要分布于肾脏、肝脏、脾脏和肺脏。肾脏是主要的代谢器官，肾组织细胞的组织蛋白酶D分解本品。5血清中分布和消除半衰期（t1/2）分别为13分钟和85分钟。6

适应症：1．用于肾细胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直肠癌、肺癌的治疗。用于癌性胸腹水的控制，也可以用于淋巴囚子激活的杀伤细胞的培养。

2．用于手术、放疗及化疗后的肿瘤患者的治疗，可增强机体免疫功能。

3．用于先天或后天免疫缺陷症的治疗．提高病人细胞免疫功能和抗感染能力。

4．各种自身免疫病的治疗，如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、干燥综合症等。

5．对某些病毒性、杆菌性疾病、胞内寄生菌感染性疾病，如乙型肝炎、麻风病、肺结核、白色念珠菌感染等具有 一定的治疗作用。5

用法用量用灭菌注射用水溶解，具体用法、剂量和疗程因病而异，一般采用下述几种方法(或遵医嘱)。
1．全身用药：
(1)皮下(或肌肉)注射：重组人白细胞介素-2(Ala) 60～100万IU/次(1～2支)，加2ml注射用水溶解，皮下注射3次/周，6周为一疗程。
(2)静脉注射：40～80万IU/m2(1～2支)，加生理盐水500ml，滴注时间不少于4小时，每天3次，6周为一疗程。
(3)介入动脉灌注：50～100万IU/次(1～2支)，2～4周一次，2～4次为一疗程。
2．区域与局部给药：
(1)胸腹腔注入：用于癌性胸腹腔积液，重组人白细胞介素-2(Ala)100～200万IU/m2(1～2支)，尽量抽去腔内积液后注入，每周1～2次，2～4周(或积液消失)为一疗程。
(2)肿瘤病灶局部给药：根据瘤灶大小决定用药量，每次用量不少于10万IU，隔日一次，4～6次为一疗程。5

不良反应各种不良反应中最常见的是发热、寒战，肌肉酸痛，与用药剂量有关，一般是一过性发热（38℃左右），亦可有寒战高热，停药后3～4小时体温多可自行恢复到正常。个别患者可出现恶心、呕吐、皮疹、类感冒症状。皮下注射者局部可出现红肿、硬结、疼痛，所有副反应停药后均可自行恢复。7

注意事项本品必须在有经验的肿瘤专科医师掌握下慎重使用。7

使用较大剂量时，本品可能会引起毛细血管渗漏综合征，表现为低血压、末梢水肿、暂时性肾功能不全等，应立即停用，积极对症处理。应注意，使用本品应严格掌握安全剂量。

药瓶开启后，应一次使用完，不得多次使用。预充式注射器包装仅为一次性使用，不得重复使用。使用本品从小剂量开始，逐渐增大剂量。应严格掌握安全剂量。使用本品低剂量、长疗程可降低毒性，并且可维持抗肿瘤活性。

孕妇及哺乳期妇女用药孕妇及哺乳期妇女慎用。小儿、有严重心脑肾并发症的老年人慎用。5

禁忌症1.对本品成分有过敏史的病人。

2.高热、严重心脏病、低血压者，严重心肾功能不全者，肺功能异常或进行过器官移植者。

3.重组人白细胞介素-2即往用药史中出现过与之相关的毒性反应： ⑴持续性室性心动过速； ⑵未控制的心率失常； ⑶胸痛并伴有心电图改变、心绞痛或心肌梗塞； ⑷心压塞； ⑸肾功能衰竭需透析>72小时； ⑹昏迷或中毒性精神病>48小时； ⑺顽固性或难治性癫痫； ⑻肠局部缺血或穿孔； ⑼消化道出血需外科手术；

规格10万IU、20万IU、50万IU、100万IU、150万IU。5