[科普中国]-PHA淋巴细胞转化试验-

PHA淋巴细胞转化试验是 T淋巴细胞与有丝分裂原在体外共同培养时，受到后者的刺激可发生形态学和生物化学的变化，部分小淋巴细胞转化为不成熟的母细胞，并进行有丝分裂的试验方法。正常值

计数淋巴细胞200个，识别淋巴母细胞(超过正常淋巴细胞2-4倍，核膜清晰，核染质疏松而成细网状，核仁明显，胞浆丰富，呈嗜碱性)、过渡型淋巴细胞(体积变化不大，仅为上述明显核变化)、小淋巴细胞(体积稍大于红细胞，核染质致密，无核仁)，统计其转化率。皮肤科转化率正常值大于58%。

临床意义PHA淋巴细胞转化率下降，是细胞免疫功能降低的反应。此项检查，皮肤科多用于疾病分型(如麻风)、病情判断(如皮肤恶性肿瘤)、药物疗效观察，以及某些免疫缺陷性和变态反应性皮肤病的研究。异常结果：免疫功能降低引发的各种症状需要检查的人群：疑似麻风、皮肤恶性肿瘤症状的病人

注意事项1.培养基成分对转化率影响较大，注意其有效期。 2.小牛血清用前需灭活。 3.培养时要保证有足够的气体，一般10ml培养瓶内液体总量不要超过2ml。 4.PHA剂量过大对细胞有毒性，太小不足以刺激淋巴细胞转化，试验前应先测定PHA转化反应剂量。 5.实验中要严格无菌操作，防止污染。不合宜人群：暂时不明检查前禁忌：注意健康的饮食，保持良好的心情检查时要求：积极配合医生

检查过程操作方法： 1.取无菌肝素抗凝血0.lml，加入1.8ml细胞培养液中，同时加入1 000μg/m1 PHA 0.1m1，对照管不加PHA，将细胞置37℃、5%CO2培养3d，每天摇动1次。 2.培养结束时吸弃大部分上清液，加入8.5g/L NH4Cl 4ml混匀，置37℃水浴10min。 3.2500r/min离心10min，弃上清液，沉淀加5ml固定液，室温作用5min。 4.2500r/min离心10min，弃上清液，留0.2ml沉淀细胞制片，迅速吹干。 5.吉姆萨染液染色 10-20min，水洗，干燥。 6.油镜计数200个淋巴细胞中转化的细胞数，计算转化率。结果判断： 1.淋巴母细胞的形态学标准细胞核的大小、核与胞浆的比例、胞浆染色性及核的构造与核仁的有无。 ⑴成熟的小淋巴细胞：与未经培养的小淋巴细胞大小一样，为6-8μm，核染色致密，无核仁，核与胞浆比例大，胞浆染色为轻度嗜碱性。 ⑵过渡型淋巴细胞：比小淋巴细胞大，约10-20μm，核染色致密，但出现核仁，此为与成熟小淋巴细胞鉴别要点。 ⑶淋巴母细胞：细胞体积增大，约20-30μm，形态不整齐，常有小突出，核变大，核质染色疏松，有核仁1-2个，胞浆变宽，常出现胞浆空泡。 ⑷其它细胞：如中性粒细胞在培养72h后，绝大部分衰变或死亡呈碎片。 2.淋巴细胞转化率的计算按上述分类检查推片头、体、尾三部分，计数200个淋巴细胞，算出百分率。转化的淋巴细胞包括淋巴母细胞和过渡型淋巴细胞，未转化的淋巴细胞指的是成熟的小淋巴细胞。在正常情况下，PHA诱导的淋巴细胞转化率为60-80%，如为50-60%则偏低，50%以下则为降低。再根据结果得出正确的判断。