“试管baby”的第一个守护者都在做什么?
1978年7月25日,世界上第一例试管婴儿出生,开启了辅助生殖技术的新篇章。胚胎学家是“试管baby”的第一个守护者,因此每年的7月25日定义为“胚胎学家日”。准爸妈将精、卵交给胚胎学家,胚胎学家精心呵护,神秘操作,让“试管baby”在温馨的大集体环境下健康发育。想不想知道胚胎学家一天的工作内容吗?分别在什么时段做哪些神秘操作吗?我们一起来看看吧。
7:20 胚胎实验室质控
一年之计在于春,一天之计在于晨,早晨是一天最美的开始。为了给“试管baby”好的开始,所以胚胎学家在早晨就检查“试管baby”的生活环境和条件是不是最舒适的,也就是胚胎实验室质控。质控内容主要包括胚胎实验室温度、湿度、环境(VOCs、氧气含量、微粒及细菌等),培养箱质控(温度、湿度、CO2及O2含量等),操作台温板温度、冰箱温度,液氮罐液氮量及温度,试剂和耗材批次等。1~2位胚胎学家到胚胎实验室后,对以上质控内容进行检测,胚胎实验室温度在24~26℃,湿度在40%~60%;二氧化碳培养箱温度37℃,CO2浓度为6%,O2浓度为5%;操作台温板温度控制在37~38℃等,若发现以上条件不满足,应及时调整,给“试管baby”一个温暖舒适的培养环境,确保胚胎能够健康发育。
7:40 IVF 取卵后第一天(D1) 剥蛋
IVF受精是将精卵放在培养皿中自由结合。精卵结合过程会将卵丘复合体中放射冠的卵丘细胞消化,而外围的颗粒细胞还紧紧裹在卵子上。胚胎学家需要用略大于卵子直径的剥卵针反复吹洗卵子,确认卵子周围的颗粒细胞脱落,便于显微镜下原核的观察。
8:00 胚胎及受精观察
精卵受精(D1)、第三天(D3)卵裂期胚胎发育、囊胚期(D5或D6)胚胎发育情况都需要在特定的时间去观察,便于评估胚胎发育的时空性,选择优质胚胎进行冷冻或移植。受精后17~20小时,D1在倒置显微镜下观察原核判断精卵受精,同时出现两原核,两极体的受精卵视为正常受精,转入G-1培养液中继续培养。若出现3个原核,视为异常受精,直接丢弃;出现1个原核,在IVF周期中,会继续培养,观察后续胚胎发育情况,若在卵泡浆内单精子注射(ICSI)周期中出现1个原核,将直接丢弃。除了判断精卵受精情况,还会从原核在卵子中位置、两原核相对位置、原核中核仁数目、空间分布等对原核进行评分。正常受精的受精卵在G-1中继续培养至D3,通过卵裂球分裂速度、卵裂球数目、碎片程度来评分D3天胚胎,选择优质胚胎要么置入G-2培养液中继续培养至囊胚,要么冷冻,要么移植。若患者在D3选择继续囊胚培养,则需要在D5或D6观察囊胚情况,通过扩张程度、内细胞团细胞数目、滋养层细胞数目来对囊胚进行评分,选择优质的囊胚行冷冻保存或移植,其余胚胎丢弃。
8:00 捡卵
捡卵用的G-MOPS-PLUS磷酸缓冲系培养基提前30分钟37℃,无CO2的培养箱预热。医生在B超引导下吸出卵泡液,胚胎学家将卵泡液迅速转移至培养皿中,并在体视显微镜下观察卵丘复合体,捡出卵丘复合体并依次用G-MOPS-PLUS清洗两次,再用G-IVF清洗一次,并放入提前平衡好的G-IVF培养液中,于37℃,6%的CO2,5%的O2的培养箱中培养,备用。
8:30 ,13:30 复苏
胚胎学家早晨到胚胎实验室后,准备复苏所用的复苏液(包括TS DS WS1 WS2),其中TS 在37℃、无CO2的培养箱预热30分钟,其余三种复苏液室温平衡30分钟,8:30开始上午复苏操作。本中心上午复苏患者基本都是上午复苏,培养至下午的囊胚移植,所以建议患者尽量在8:30之前到达中心完成验证工作,避免影响后续的培养及移植。下午13:30还有少部分患者复苏D3卵裂期胚胎。
8:30,13:30 移植
8:30,13:30 都可以开始移植,移植为什么两个时间,有区别吗?8:30移植都是包含新鲜移植、D3胚胎移植及D3胚胎复苏并囊胚培养的移植等。13:30移植主要是上午复苏,体外培养2小时以上的囊胚移植。
9:30 ICSI D0 剥蛋
8:00开始采卵,其中ICSI周期的患者卵丘复合体取出后,在G-IVF中培养1~2小时后,可行剥卵操作,胚胎学家常称之为“剥蛋”。剥蛋就是用一定浓度的透明质酸酶消化卵丘复合体,用略大于卵子直径的剥卵针反复吹洗卵子,剥离卵丘细胞和颗粒细胞。剥蛋后,胚胎学家需在显微镜下观察卵子中是否含有第一极体,若有第一极体,卵子为成熟卵子(MII)并置于G-IVF微滴中继续培养,下午13:30行ICSI操作。卵子中若无第一极体,即为不成熟卵子(MI、GV),将其丢弃。
9:45 冷冻
7:40胚胎观察后,胚胎学家将D3、D5、D6中的优质胚胎情况反馈给临床医生。临床医生会依据患者个体化情况、患者自己意愿,选择优质胚胎的去向:冷冻、移植或囊胚培养,随后医生将医嘱交回胚胎学家,胚胎学家遵医嘱,对优质胚胎行冷冻保存操作。
10:00 换液
胚胎学家将D3的优质胚胎情况反馈给临床医生。临床医生会依据患者个体化情况、患者自己意愿,决定优质胚胎是否继续囊胚培养。胚胎学家遵囊胚培养的医嘱,对优质胚胎行换液操作,即将优质胚胎从G-1培养液中置换到G-2培养液中,于37℃,6%的CO2,5%的O2的培养箱中培养2~3天。
10:00 活检
植入前胚胎遗传学筛查/诊断主要用于单基因病、反复移植失败、反复流产、高龄等患者,随着活检和遗传学分析技术的进步,此类患者的周期比例也逐渐增高。目前胚胎学家主要的活检技术是囊胚滋养层细胞活检技术,即利用显微操作仪吸取3~5个滋养层细胞,用于单细胞测序分析染色体数目、结构等。胚胎活检后行全胚冷冻,待活检结果出来后,选择正常的胚胎进行移植。
11:20 体外受精(IVF)
HCG注射后38~40小时,是胚胎学家IVF授精时机。胚胎学家将处理好的卵子和精子按照一定比例混合培养,让精卵自由组合,完成IVF授精过程。
13:30 ICSI
ICSI周期的单精子注射卵子的操作从13:30开始, 通过显微操作系统,将单个精子注入卵子。ICSI结束后,直接将注入精子后的MII卵子移入G-1培养液中,于37℃,6%的CO2,5%的O2的培养箱中培养,待D1原核观察。
16:30 捞蛋、早剥
IVF受精4~6小时,胚胎学家会捞蛋和早剥,其目的一是依据第二极体是否排出,判断精卵受精情况;二是改善精卵的培养环境。若患者为原发不孕、第一IVF周期,则会早剥2~3个卵子,如果出现1~2个卵子出现双极体,则说明受精情况良好。若受精情况不好,则会于18:00再次观察受精情况,无改善立即行进行补救ICSI。
13:30 配液、培养皿上贴每位患者专用标签
卵子受精、培养,胚胎培养所用的培养液都应37℃,6%的CO2培养箱中平衡8小时以上,因此应提前配制第二天采卵、胚胎培养所用的培养液。除了配制平衡培养所用液体,还应在每个培养皿上贴上患者门诊号所对应的芯片和核对条码,便于操作时的核对。
除以上工作外,胚胎学家还有病历登记的信息书写及记录,各种质控、胚胎实验室数据的录入,实验仪器设备的维护等等。在幕后默默照顾“试管baby”的胚胎学家,为每一个受精卵及胚胎保驾护航,双手捧起“试管baby”,承载了生命的起点。