艾滋病检测

　　

　　AIDS的实验室检测主要包括HIV抗体、HIV核酸、CD4+T淋巴细胞、HIV基因型耐药检测等。HIV1/2抗体检测是HIV感染诊断的金标准；HIV核酸定量（病毒载量）检测和CD4+T淋巴细胞计数是判断疾病进展、临床用药、疗效和预后的两项重要指标；HIV基因型耐药检测可为高效抗反转录病毒治疗（HAART）方案的选择和更换提供科学指导。

　　方法：

　　1.HIV1/2抗体、抗原检测

　　包括筛查试验（含初筛和复检）和确证试验。HIV1/2抗体筛查方法包括ELISA法、化学发光法或免疫荧光试验、快速检测（斑点ELISA和斑点免疫胶体金或胶体硒快速试验、明胶颗粒凝集试验、免疫层析试验）等，确证试验常用的方法是免疫印迹法。

　　筛查试验呈阴性反应可出具HIV1/2抗体阴性报告，见于未被HIV感染的个体，但处于窗口期的新近感染者筛查试验也可呈阴性反应。若呈阳性反应，应用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂进行重复检测，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行重复检测，如两种试剂复测均呈阴性反应，则为HIV抗体阴性；如有一种或两种试剂呈阳性反应，需进行HIV抗体确证试验。确证试验无HIV特异性条带产生，报告HIV1/2抗体阴性。确证试验出现HIV1/2抗体特异带，但不足以判定阳性，报告HIV1/2抗体不确定，可在4周后随访。如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间发生带型进展，符合HIV抗体阳性判定标准则为HIV抗体阳性，如带型仍不满足阳性标准，继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足HIV阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性标准可视情况决定是否继续随访。经确证试验HIV1/2抗体阳性者，出具HIV1/2抗体阳性确认报告，并按规定做好咨询、保密和报告工作。

　　抗原检测：主要检测HIV1的P24抗原核心蛋白。感染早期和晚期，P24抗原以游离形式出现，多数情况下以抗原抗体复合物形式存在。P24一般在感染后1-2周内即可检出，随P24抗体产生而减少。一般持续0.5-5个月，如持续存在或再度出现则提示预后不良。

　　2.病毒载量测定

　　常用方法有反转录PCR（RT-PCR）、核酸序列依赖性扩增（NASBANuclisens）、分枝DNA信号放大系统（bDNA）和实时荧光定量PCR扩增（realtime　PCR）。病毒载量测定的临床意义包括预测疾病进程、提供开始抗病毒治疗依据、评估治疗效果、指导治疗方案调整以及HIV感染早期诊断的参考指标。小于18月龄的婴幼儿HIV感染诊断可以采用核酸检测方法，以2次核酸检测阳性结果作为诊断的参考依据，18月龄以后再经抗体检测确认。HIV病毒载量检测结果低于检测下限，报告本次实验结果低于检测下限，见于没有感染HIV的个体、接受成功的抗病毒治疗或机体自身可有效抑制病毒复制的部分HIV感染者。HIV病毒载量检测结果高于检测下限，可作为诊断HIV感染的辅助指标，但不能单独用于HIV感染的诊断。推荐病毒载量检测频率：对于已接受抗病毒治疗6个月以上、病毒持续抑制的患者，可每6个月检测1次。HAART6个月内或病毒载量抑制不理想或需调整治疗方案时病毒载量的检测频率需根据患者的具体情况由临床医师决定。如条件允许，建议未治疗的无症状HIV感染者每年检测1次，HAART初始治疗或调整治疗方案前、初治或调整治疗方案初期每4～8周检测1次。病毒载量低于检测下限后，每3～4个月检测1次，对于依从性好、病毒持续抑制达2～3年以上、临床和免疫学状态平稳的患者可每6个月检测1次。

　　3.CD4+T淋巴细胞检测

　　HIV感染人体后，出现CD4+T淋巴细胞进行性减少，CD4+/CD8+T细胞比值倒置，细胞免疫功能受损。如果进行HAART，CD4+T淋巴细胞在病程的不同阶段可有不同程度的增加。目前常用的CD4+T淋巴细胞亚群检测方法为流式细胞术，可以直接获得CD4+T淋巴细胞数绝对值，或通过WBC分类计数后换算为CD4+T淋巴细胞绝对数。CD4+T淋巴细胞计数的临床意义是了解机体的免疫状态和病程进展、确定疾病分期和治疗时机、判断治疗效果和HIV感染者的临床合并症。CD4+T淋巴细胞计数的检测间隔时间需根据患者的具体情况由临床医师决定，建议对于CD4+T淋巴细胞数>350个/μL的HIV无症状感染者，每6个月检测1次；对于已接受抗反转录病毒治疗的患者在治疗的第1年内每3个月检测1次，治疗1年以上且病情稳定的患者可改为每半年检测1次。

　　4.HIV基因型耐药检测

　　耐药测定方法有基因型和表型，目前国内外多采用基因型检测。推荐在以下情况进行HIV基因型耐药检测：抗病毒治疗病毒载量下降不理想或抗病毒治疗失败需要改变治疗方案时；如条件允许，在抗病毒治疗前，最好进行耐药性检测，以选择合适的抗病毒药物，取得最佳抗病毒效果。对于抗病毒治疗失败者，耐药检测须在病毒载量>1000拷贝/ML且未停用抗病毒药物时进行，如已停药须在停药4周内进行基因型耐药检测。HIV基因型检测出现HIV耐药，表示该感染者体内病毒可能耐药，同时需要密切结合临床，充分考虑HIV感染者的依从性、对药物的耐受性及药物的代谢吸收等因素进行综合评判。改变抗病毒治疗方案需要在有经验的医师指导下进行。HIV耐药结果阴性，表示该份样品通过基因型耐药检测未检出耐药性，但不能确定该感染者不存在耐药情况。

　　5.病毒分离

　　常用方法为共培养法，即用正常人外周血液分离单个核细胞，加PHA刺激并培养后，加入患者单个核细胞。目前只用于实验研究，不作为诊断指标。

　　HIVRNA和P24抗原的检测能缩短抗体“窗口期”和帮助早期诊断新生儿的HIV感染。