[科普中国]-蛋白质分析技术

用于分析蛋白质的含量、纯度、分子量、氨基酸组成和结构等的技术。

含量分析，氨基酸是含氮的化合物，一般蛋白质约含15%的氮，用克氏定氮法能计算出样品中的蛋白质含量。用双缩脲法测肽链的量用紫外分光光度计测在280nm波长的吸收值，即蛋白质中芳香族氨基酸的值用Folin酚试剂测蛋白质中酪氨酸的值以及用TNB S(三硝基苯磺酸)测定蛋白质中的赖氨酸的值等方法都能算出蛋白质的含量。简单蛋白质只含氨基酸，容易测定。复合蛋白质还另含辅基，如糖、脂质、核酸和金属等化学物质，还需用其他分析方法鉴定。

简介用于分析蛋白质的含量、纯度、分子量、氨基酸组成和结构等的技术。

含量分析氨基酸是含氮的化合物，一般蛋白质约含15%的氮，用克氏定氮法能计算出样品中的蛋白质含量。用双缩脲法测肽链的量用紫外分光光度计测在280nm波长的吸收值，即蛋白质中芳香族氨基酸的值用Folin酚试剂测蛋白质中酪氨酸的值以及用TNB S(三硝基苯磺酸)测定蛋白质中的赖氨酸的值等方法都能算出蛋白质的含量。简单蛋白质只含氨基酸，容易测定。复合蛋白质还另含辅基，如糖、脂质、核酸和金属等化学物质，还需用其他分析方法鉴定。1

纯度鉴定从样品中纯化蛋白质，其纯度鉴定方法有聚丙烯酰胺凝胶电泳、电聚焦电泳和末端分析等。若两种电泳图谱都呈现一条区带或恒定的末端氨基酸，就可认为此蛋白质已经纯化。1

分子量测定一般把分子量大于10 000的称为蛋白质，小于10 000的称作多肽。最大的蛋白质的分子量可上百万。测定的方法如凝胶过滤、S D S-聚丙烯酰胺凝胶电泳和超离心等，后者用于测定分子量较大的蛋白质，需使用精密而昂贵的仪器。1

氨基酸组成分析经过酸、碱或酶处理把蛋白质的肽链拆开，即水解成游离氨基酸。用纸层析、薄层层析法等可定性鉴定组成蛋白质的20种氨基酸。用离子交换层析法可以精确测定出各种氨基酸的含量。用离子交换层析法原理设计制造的氨基酸自动分析仪，能精确、快速定量测定蛋白质的氨基酸组成，是目前广泛应用的方法。1

结构分析各种蛋白质均具有其自身特定的氨基酸序列的多肽链，即一级结构。多肽链又以特定的卷曲折叠方式形成空间结构，即二级、三级和四级结构。测定一级结构的主要方法：是根据艾德受(Edman)发明的化学反应，用试剂异硫氰酸苯酯从链的N(-NH2)端逐个降解成氨基酸的衍生物，鉴定每步反应的产物，可得出肽链的氨基酸序列。根据这个原理设计的蛋白质序列仪，用毫克或微克的样品一次可自动测定40～50个序列。如果要得到完整的一级结构，尚需把蛋白质裂解成肽的碎片，经过肽的分离纯化，肽的序列测急然后连成完整的序列。尽管有精密的自动化仪器，一级结构分析仍是复杂、量大、费时的工作。近年来广泛使用测定DNA的序列再推导出氨基酸序列的方法使序列分析又大大简化了。空间结构测定包括使用晶体X-衍射分析、CD光谱、核磁共振谱(NMR)和激光拉曼光谱分析等方法，要求更为复杂的技术和山贵的仪器。1

本词条内容贡献者为:

赵阳国 - 副教授 - 中国海洋大学