[科普中国]-半胱氨酸数

概述

自然界中，大多数蛋白质都含有半胱氨酸残基，半胱氨酸残基之间可以形成二硫键，而二硫键对蛋白质的三级和四级结构的稳定性是非常重要的。二硫键可以使蛋白质免受损坏，并且可以增加蛋白质的半衰期，因此二硫键可以维持蛋白的稳定性。

原理4-乙烯吡啶可以结合半胱氨酸，从而阻止半胱氨酸形成二硫键，因此，一个4-乙烯吡啶可以和一个半胱氨酸结合。在提取蛋白质样品时，一组样品加入4-乙烯吡啶，另一组样品不加4-乙烯吡啶，然后进行质谱鉴定。增加的分子量和该蛋白质所含有的半胱氨酸数目相关，即高分子量蛋白每含有一个半胱氨酸残基，其分子量会相应增加大约105.14Da（即一个4-乙烯吡啶的分子量）1。

计算方法首先通过质谱获得同一种蛋白在两种处理（用4-乙烯吡啶处理和未用4-乙烯吡啶处理）下的分子量分别是多少，然后用4-乙烯吡啶处理过的分子量减去未用4-乙烯吡啶处理的分子量，最后再除以105，得到的结果就是该待测蛋白中所含有的半胱氨酸残基的数目。

质谱鉴定条件采用AppliedBiosystems公司生产的质谱仪器4800，质谱参数为激光强度2500，质量范围65-95kDa，加速电压25kV，板极电压92%，尺度0.3%，延迟时间1000ns。对获得的蛋白质质量谱利用软件进行数据处理分析2。