[科普中国]-磷酸酶试验

磷酸酶

磷酸酶（phosphatase）是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基。磷酸酶的作用与激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如ATP，将磷酸基团加到对应底物分子上。在许多生物体中都普遍存在的一种磷酸酶是碱性磷酸酶。

酸性磷酸酶(acid Phosphatase，ACP)是一种在酸性条件下催化磷酸单酯水解生成无机磷酸的水解酶，其催化反应的性质和ALP类似，最适pH5—6。ACP主要分布于人体的前列腺、肝、脾、乳汁、红细胞、血小板及骨骼等组织和器官中，以前列腺含量最为丰富。而正常人血清中ACP主要来自骨、肝、肾、脾等组织，所以ACP含量无性别和年龄的差异。

稳定性：在室温(20～25℃)下非常不稳定。

碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP/AKP)是一种含锌的糖蛋白，在碱性条件中(最适pH为10)可以水解各种天然及人工合成的磷酸单酯化合物而释放无机磷；同时又具有磷酸转移酶的作用。ALP属于同源二聚体蛋白，分子量为56kDa，每个单体由499个氨基酸组成：其广泛分布于人体的肝脏、肾脏、骨骼、肠和胎盘等组织和器官中，肝脏中含量最丰富。正常成年人血清中ALP主要来源于肝脏和骨骼，生长期儿童血清ALP主要来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝脏组织。

半寿期：3d。

稳定性：室温(20～25℃)和冰箱(2～8℃)储存均可使ALP活性升高，最好在采血当天分析1。

磷酸酶试验方法(1)原理

磷酸酶是磷酸脂的水解酶，可使单磷脂水解，其反应可根据反应基质不同而异，如用磷酸酚酞为基质，经磷酸酶水解后可释放酚酞，在碱性环境中呈红色。

(2)方法

取待检菌接种于磷酸酚酞琼脂平板上，置35℃孵育18～24h，于平皿盖内加1滴浓氨水，熏蒸片刻，观察结果。亦可用液体培养基，经孵育后，向管内加400g/L氢氧化钠溶液1滴，观察结果。

(3)结果

菌落变为红色者为阳性。

(4)应用

主要用于致病性葡萄球菌与非致病性葡萄球菌的鉴别，前者为阳性，后者为阴性2。

酸性磷酸酶试验检验精斑方法之一。精斑中含有大量酸性磷酸酶(ACP)，其含量比其它体液和组织高出几十倍甚至几百倍，因此，检测ACP是鉴定精斑的一种有效手段。

原理：精液中的酸性磷酸酶，可分解磷酸苯二钠，产生萘酚，萘酚经铁氰化钾的作用，与氨基安替比林结合，产生红色醌类化合物。

试剂：枸橼酸1.4g，IN氢氧化钠2.5ml，磷酸苯二钠0.2g，4-氨基安替比林0.6g，蒸馏水加至100ml。显色剂：IN氢氧化钠16.7ml，碳酸氢钠1.4g，铁氰化钾3.6g，蒸馏水加至100ml。

方法：剪取检材少许(0.1×0.1cm，最好取斑痕周围部分，因该处酸性磷酸酶活性最高)，置试管内，加缓冲液3～5滴，径37℃ 5～7分钟后，再加显色液3～4滴。

阳性反应为立即出现浅红色至深红色，精斑浓度过高，可出现红色沉淀f阴性反应为橙黄色。该试验灵敏度较高，但往往对妊娠者，或新鲜的阴道分泌物以及男性尿迹等也有阳性反应，因此检验时必须进行无斑痕处理和各种已知样本的对照。