[科普中国]-咖啡因分配荧光法

咖啡因分配荧光法研究背景

苯并(a)芘(BaP)是一种强致癌物质。由于环境和食品加工过程的污染，食品中特别是烟熏的肉类、油脂和水产品常含有超过卫生标准的苯并(a)芘；动物性食品在加工过程中或加工工艺不合理时，燃料或脂肪受高温而热解产生苯并(a)芘，因而常需进行检验。食品中苯并(a)芘的分析常采用萃取分离净化后再用各种色谱法测定；如国标法采用二甲基亚枫或二甲基酰胺与环己烷或石油醚作液一液分配，缺点是常有乳化现象，且分离慢。

近年来，有人用Gertz的咖啡因络合萃取法分离食品(特别是油脂)中的多环芳烃，净化后用分光光度法、高压液相色谱和气相色谱进行测定。在此基础上用改进的方法——咖啡因分配荧光法，净化后用薄层板层析，直接用荧光扫描定量测定油脂中苯并(a)芘1。

咖啡因分配荧光法原理样品的石油醚提取液，先以甲酸洗去杂质，再以咖啡因的甲酸溶液萃取，苯并(a)芘以水溶性的咖啡碱复合物分离出来，经薄层板层析与其他多环芳烃分离，紫外灯下定位后，进行荧光扫描定量。

咖啡因分配荧光法的优点（1）简便、快速，样品经分配后，浓缩液用C18预处理柱处理，省去了胶层洗脱等步骤，节省时间，排除大量有毒试剂；

（2）结果准确可靠，回收率基本满足要求（国标法回收率80.6%）；

（3）和国标法相比，本法试剂便宜、低毒、用量少，主要试剂是咖啡因-甲酸，改善了对环境的污染，减少了对操作人员的毒性影响。

咖啡因分配荧光法具体步骤样品的提取与优化

（1）萃取：称25g食用油与60mL石油醚混合转入分液漏斗中，用甲酸洗三次，每次20mL，振荡2min，弃甲酸。用15%咖啡因-甲酸溶液连续萃取三次，每次20mL，振荡3min。将三次收集的60mL萃取液转入三角烧瓶中，加2%硫酸钠水溶液120mL，加石油醚50mL，猛烈振荡4min，转入250mL分液漏斗中分层。下层再转入原三角烧瓶中，加石油醚50mL重提一次，合并两次石油醚，以44%的甲酸洗2次，每次20mL，摇0.5min。

(2)浓缩定容：将石油醚通过装有无水硫酸钠的漏斗脱水，转入浓缩仪中，减压蒸至近干，以环己烷定容1mL。

(3)净化：将此浓缩液通过C18预处理柱，密闭、避光、冷藏。

薄层层析

(1)点样：将薄层板置点样架上，距底边2cm处用铅笔划一横线，并标出点样位置，二点间距1cm以上，取40μL浓缩液和20μLBaP标准使用液分别置于薄层板上，斑点直径最好在5mm以下(可借助吹风机边点边吹)。

(2)展开：将点好的薄层板置于层析缸内，缸内预先加入展开剂，使底边浸入溶液中(约0.5cm)，避光展开18-20cm，取出晾干，在紫外灯下作定位标记。如分离不彻底，可重复展开，用薄层扫描仪作定量测定。

标准曲线制作

用标准贮备液配成0.5、1、2、4、8μg/mL)的标准使用液，分别用5μL毛细管吸取点于薄板上，通过扫描，制出标准曲线。

最低检出限

用1μL毛细管分别吸取0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00(μg/mL）的标准使用液，点于薄板上，经薄层扫描，得出苯并(a)芘的检测灵敏度为0.1ng。

方法的精密度试验

分别取7份豆油，苯并(a)芘加入量为0.2μg/kg，测定。

方法的准确度试验

取香油6份每份25g，其中3份加入苯并(a)芘量为0.4μg/kg，另3份加入量为1μg/kg，测定。

利用CS-930双波长薄层扫描仪测定油脂苯并(a)芘，具有选择性强，应用广的优点，为测定油脂中苯并(a)芘提供了一个新的方法2。