[科普中国]-微呼吸测试

微呼吸测试的定义

微呼吸测试可直接测定生物个体的耗氧量，个体耗氧量是间接监测进行呼吸作用的生物体新陈代谢状况的重要指标，耗氧量的变化能够反映生物体在不同环境中的能量需求。一般可用微呼吸仪进行微呼吸测试。

微呼吸测试研究仔鱼对不同盐度耐受近年来，夏秋季普遍多雨，而降水易导致近岸海水盐度变化，进而影响鱼类机体的渗透压调节、能量分配和代谢调整等生理活动，最终威胁鱼类的生长和存活。一般而言，鱼类盐度耐受性测试实验是研究鱼类渗透压调节能力的一种有效方法，直接反映鱼类对盐度的耐受能力。个体耗氧量是间接监测鱼体新陈代谢状况的重要指标，耗氧量的变化能够反映鱼体在不同盐度环境中的能量需求。许多研究表明，不同的盐度环境能引起耗氧量的变化，但因实验鱼的种类、适应时间、实验设计和实验方法等的不同也会导致耗氧量变化规律有差异[9]。盐度变化对银鲳的影响研究相对较少，仅尹飞等研究了低盐胁迫对银鲳幼鱼肠道消化酶、肝脏抗氧化酶、鳃和肾ATP酶活力的影响。仔鱼期是鱼类整个生活史中的脆弱敏感阶段，也是开展人工育苗成功的关键时期之一。郭单勤以银鲳仔鱼为对象，研究盐度骤变对其存活和耗氧的影响，旨在探究银鲳仔鱼对环境盐度的耐受能力和耗氧规律，为开展银鲳仔鱼的人工培育和增养殖活动提供理论依据1。

微呼吸测试的方法采用静水密闭法。正式实验开始前，需进行预备试验以确定耗氧试验合理持续时间和试验鱼尾数，以保证耗氧变化的可测量性和银鲳仔鱼在实验期间的正常生理活动。实验时将自然盐度培育下的2日龄或4日龄仔鱼置于装有不同盐度海水微呼吸仪的呼吸瓶(体积约10mL)中，每个盐度下放各日龄仔鱼10尾，海水略高出瓶口少许，立即用微呼吸仪的探头塞紧密封瓶口，保持瓶内无空气残留。仔鱼在呼吸瓶中适应稳定20min，记录之后10min始末呼吸瓶的溶氧量，测定3次。在一天中固定时间(下午16:00～24:00)进行测定，以尽量减小一天中鱼体自身耗氧量的差异。实验期间，为了减少噪音、光照等外界因素引起的耗氧量变化，实验整个过程均在密闭暗室内进行，避免外界因素影响鱼的呼吸。个体耗氧量按下式计算:

R=(DO0－DOt)V/NH

式中，R为个体耗氧量[μmolO2/(尾·h)];DO0为起始时呼吸瓶的溶氧量(mmol/L);DOt为一定时间后呼吸瓶的溶氧量(mmol/L);V为实验瓶的体积(L);N为受试鱼尾数;H为试验时间(h)2。

不同发育阶段银鲳仔鱼的个体耗氧量与盐度的关系盐度对银鲳仔鱼代谢水平影响较大，银鲳仔鱼的个体耗氧量在高盐环境下较高，55盐度下银鲳仔鱼的个体耗氧量最高，盐度5最低(图4)。2日龄银鲳仔鱼急性盐度突变至盐度10、20、30，其个体耗氧量没有显著性差异，盐度40和50环境下耗氧量明显升高;4日龄银鲳仔鱼在盐度5～40环境下其耗氧量没有显著差异，显著低于盐度50和55。在不同盐度环境中银鲳仔鱼的个体耗氧量2日龄均高于4日龄。在高盐环境(盐度50和55)中，仔鱼入水即表现出急躁不安，游动速度加快，而后又减慢，并沉于容器底部，身体侧卧。在低盐度水(盐度5)中，银鲳仔鱼沉于容器底部，几乎不进行游动。中间盐度水体中的银鲳仔鱼开始活动正常，随着时间的延长，游动也会逐渐减弱。