淀粉α化度的应用
在粮食食品、饲料的生产中,常需要了解产品的α化度。因为α化度的高低影响复水时间,影响食品或饲料的品质。例如方便面理化指标(GB 9848-88)规定,油炸方便面的α度>85.0%,热风干燥面α度>80.0%,米粉的熟透的质量指标在85%左右。
淀粉α化度的测定葡萄糖淀粉酶法糊化淀粉容易被淀粉酶消化,因此可用消化相对百分率来准确计算淀粉α化度。
1.仪器与试剂
搅拌器,玻璃均质器,1~2ml移液管,恒温水浴,台式离心机。
99%乙醇,2mol/L醋酸缓冲液(pH4.8),10mol/L氢氧化钠,2mol/L醋酸,2.63ug/ml葡萄糖淀粉酶液,0.025mol/L盐酸.
2.测定步骤
试样的调制:试样20g(或20ml),加入 200ml 99%的乙醇,投入高速旋转的家用混合器中连续旋转1min,使之迅速脱水。生成的沉淀用3号玻璃过滤器抽滤,用50ml 99%的乙醇,接着用50ml乙醚脱水干燥后,放在氯化钙干燥器中,以水力抽滤泵减压干燥过夜,用研钵将其轻轻粉碎,仍保存在同样的干燥器中备用。
操作:将100mg上述的干燥试料放入磨砂配合的玻璃均质器中,加8ml蒸馏水,用振动式搅拌机搅拌至基本上均匀为止。接着将均质器上下反复几次,使之成为均匀的悬浮液。再用振动式搅拌机均匀化,随即各取悬浮液2ml注入2只容量为20ml的试管中,分别用作被检液和完全α化检液。向被检液试管加 2mol/L醋酸缓冲液(pH4.8)1.6ml和水0.4ml,而往完全α化检液试管添加 10mol/LNaOH溶液0.2ml,在证实已于室温下完全溶解之后,加2mol/L醋酸1.6ml(醋酸的添加量需预先通过试验决定,其量为使pH调至4.8时所用的醋酸量),最后加水使容量为4ml。将这2只试管放在37℃的恒温槽中预保温数分钟后,添加酶液1ml(2.63ug),每隔10~15min振荡一次,共反应60min。然后,得反应液 0.5ml加入预先放有10ml 0.025mol/L盐酸(起停止反应的作用)的锥底离心管中,上下振荡数次,在转速为3000r/min的离心机中分离10min。取上层清液0.5ml,用蒸馏水稀释1倍,用Somogyi-Nelson法定量还原精,并从下式求出α化度:
α化度(糊化度)=被检液的光密度/完全α化检液的光密度
注意:市售的玻璃均质器磨砂配合是硬性的配合,需用150或400目的金刚砂来调节配合。均质器的配合,以在干燥状态下磨砂配合棒能缓慢地自然落下者为好。
葡萄糖淀粉酶用的是内孢霉或黑曲霉的粗酶。酶活力以在pH4.8的醋酸缓冲液(0.2mol/L)中,在37℃能将0.2%的可溶性淀粉生成1μg分子葡萄糖的酶量作为1个单位(U)。
碘电流滴定法糊化淀粉能与碘结合成螺旋状复合物,生淀粉则不能。此法就是将试样在悬浮液和完全α化的溶液状态,通过电流滴定法测定碘的结合量,从两者之比来求糊化度的方法。
1.仪器与试剂
搅拌器,玻璃均质器,10ml移液管,恒温水浴,滴定管,电流计。
99%乙醇,乙醚,1mol/L HCI,0.5mol/L KOH,0.4mol/L KI, 0.001 mol/L KIO3。
2.测定步骤
精确称取试样淀粉30mg(直链淀粉用5.0mg),放入玻璃制磨砂配合的手动均质器中,加水 10ml,使之充分分散(约往复20次)。在分散液里加 lmol/L HCl 10ml与0.5mol/L KOH 10ml的混合液,以及 0.4mol/L KI 5ml,并加水定容为100ml。将此混合液移入滴定用的带夹套的烧杯里,在20~30℃的温度范围内,用0.001mol/L KIO3溶液滴定。每滴加 0.2ml,经 2min后读取电流值,将它对应于滴定值作图,求得碘结合量。试样测定时,先将它完全溶解在 10ml 0.5mol/L的KOH中,然后加 10ml HCI与5ml 0.4mol/L KI,再加水定容成100ml,以后的滴定操作同上。
α化度(糊化度)=试样悬浮的碘结合量/溶液状(完全α化)试样碘结合量
注意:本方法对于直链淀粉是专一的。