[科普中国]-感受态

概述

受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。

例如野生型大肠杆菌并不容易转化，这是由于DNA无法进入野生型大肠杆菌的细胞。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的感受态有两种类型：一种是自然感受态（Natural competence），自然感受态细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是人工感受态（Artificial competence），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入外源DNA。枯草芽孢杆菌属于能够发展为自然感受态的细胞，大肠杆菌就属于需要人工处理的细胞。

感受态细胞的制备感受态细菌细胞的转化采用氯化钙的方法。不含有质粒的大肠杆菌菌株在室温下使其解冻并加入40mL S.O.C 的液体培养基。在37 ℃培养1h , 然后将其转移到37 ℃摇床上以200r /min 速度培养2 ～3h， 直到OD600 达到0.2 ～ 0.4。不同细菌菌株的最适宜OD600 是不同的。在4 ℃下以8000r /min 的速度离心1min， 然后用一半体积(20 mL)已灭菌的预冷的TB(CaCl2)溶液进行悬浮, 并在冰上保存25 min。如上进行另一次离心后，所得到的细胞沉淀用十分之一体积(4mL)预冷的TB (CaCl2)溶液进行悬浮获得感受态细胞。感受态细胞可于4 ℃下保存3d。

感受态细胞的保存

转移1.6 mL的感受态细胞悬浮液至已消过毒的冷藏管内，并加入已灭菌的0.4 mL甘油使最终浓度达到20%，混匀。甘油储液可在- 4 ℃，- 20 ℃和- 70 ℃下分别储存待用2。

转化效率按下公式计算:转化效率(cfu·μg -1)=(每皿转化子平均数×菌悬液稀释倍数) 质粒微克数。实验涉及的一般转化, 采用pUC19质粒。