[科普中国]-保健食品中甘草酸的测定

本标准规定了保健食品中甘草酸的测定方法。

本标准适用于以甘草酸作为主要功效成分添加与保健食品中的甘草酸的测定。

当取样量3.0g，定容至25ml，进样量10µL时，方法的检出限（LOD）为1.0×10-3g/kg；方法的定量限（LOQ）为3.0×10-4g/kg。线性范围为5.0µg/mL~50µg/mL。

根据甘草酸易溶于醇、水等极性溶剂的理化特性，不含油试样中的甘草酸采用流动相进行提取，对于含油试样则需要石油醚去油后再用流动相提取，过滤后进高相液相色谱仪，经反向C18色谱柱分离后，由紫外检测器检测，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。

1、甲醇（CH3OH）：优级纯

2、乙酸(CH3COOH)：分析纯

3、石油醚（沸程60~90℃）：分析纯

4、醋酸铵（CH3COONH4）：分析纯

5、0.2mol 醋酸铵溶液：取醋酸铵15.42g，加水溶解成100ml。

6、水（H2O）：为实验室一级用水，电导率（25℃）为0.01mS/m

7、甘草酸标准品：纯度≥99﹪

8、甘草酸标准储备液（1.00mg/ml）：准确称量甘草酸铵标准品0.01g（精确至0.0001g）于10.0ml容量瓶中，加入流动相溶解并定容至刻度，混匀（标准储备液放于2℃~10℃冰箱中，有效期90d）

9、甘草酸标准使用液（100µg/mL）：准确吸取1.00mL甘草酸标准储备液于10.0mL棕色容量瓶中，用流动相定容至刻度（此标准使用液在避光条件下于2℃~10℃冰箱中，可保存90d）

1、高效液相色谱仪：附紫外检测器。

2、超声波清洗器

3、离心机：4000r/min

4、氮吹仪

1、试样处理

（1）一般试样：根据试样中甘草酸是含量，称取0.5g~3g均匀试样（精确至0.001g），置于50mL棕色容量瓶中，加入流动相20mL，使溶液每毫升含甘草酸20µg/mL，超声波提取20min后，加流动相定容至刻度，摇匀，以3000r/min离心5min，过0.45µm滤膜，取滤液备用（如试样中甘草酸含量较高，可适当将试样稀释后进样）。 （2）含油试样：根据试样中甘草酸的含量，称取称取0.5g~3g均匀试样（精确至0.001g），置于25mL离心管中，加入15mL石油醚振荡1min，以3000r/min离心5min，弃去石油醚，重复该程序三次，吹氮仪吹干后，用流动相将所有内容物转移至50mL容量瓶中，其余步骤同（1）。

2、标准曲线的制备

临用前将甘草酸铵标准使用液，用流动相配成5.00µg/mL 、10µg/mL 、20µg/mL 、40µg/mL 、50µg/mL的标准系列。

3、液相色谱参考条件

（1）色谱柱：ODS C18柱，250mm×4.6mm，5µm。

（2）柱温：25℃

（3）紫外检测器：检测波长250nm。

（4）流动相：甲醇+0.2mol/L醋酸铵溶液+乙酸=67+33+1 。

（5）进样体积：10µl 。

（6）流速：1.0mL/min。

（7）色谱分析：将标准溶液及试样溶液注入色谱中，以保留时间定性，以试样峰面积或峰高与标准比较定量。

试样中甘草酸的含量按式子（1）进行计算：

X=c×V×1000×F×0.98/m×1000×1000 (1)

式中：

X——试样中甘草酸的含量，单位为克每千克（g/kg）；

C——从标准曲线查得的浓度，单位为微克每毫升（µg /mL）；

V——试样定容体积，单位为毫升（mL）；

F——稀释倍数；

0.98——甘草酸铵（分子质量：839.97）换折算为甘草酸（分子质量：822.93）的比值；

M——试样的质量，单位为克(g)；

计算结果保留两位有效数字。

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%1。

在上述条件下的色谱图见图1和图2。