[科普中国]-亲和标记

简介

亲和标记(affinity labeling)

对酶的活性部位、受体的结合位点进行特异标记的方法。试剂A-X的A基团和X基团可分别与不同的位点进行结合,从而将两种物质交联在一起。如用亲和标记法分离细胞表面受体时, 先将细胞与超量标记的激素(配体)混合,以饱和所有特异受体的激素结合位点；洗去多余的激素,然后加入能够与受体和配体结合的共价交联剂将激素与受体进行共价交联达到分离的目的。

原理亲和标记指用对具有特异的亲和性物质中导入化学反应基团的试剂，有选择地修饰存在于活体高分子的对应结合部位的官能基。因根据亲和标记的目的而设计的试剂，对相应的活体高分子具特异的亲和性，故形成试剂与活体高分子的特异的复合体，结果在结合部位试剂之浓度特别高，因而结合部位的官能基得到良好的修饰。例如，对以芳香族氨基酸为特异的基质的胰凝乳蛋白酶，用基质类似物的TPCK（L-1-甲苯磺酰胺-2-苯乙基氯甲基酮）与之反应，则TPCK在苯丙氨酸之侧链部分与胰凝乳蛋白酶进行特异的结合，在氯化甲酮部分反应，只是在活性部分存在的组氨酸残基有选择地烷基化。为了标记酶的活性中心。效应物的结合部位、抗体的抗原（或不全抗原）的结合部位、受体的激素或神经传递物质结合部位、植物外原凝集素的糖结合部位和核糖体的核酸结合部位等，分别设计出导入与之相应的活体分子化学反应基的试剂。最近基于这样的目的，即从一般与化学试剂反应性低的残基所结合的部位为特异标记，应用了导入在光照下获得高度化学反应性的基团的活体分子类似物（光亲和标记photoaffinity labeling）。

抗体结合部位(Fab分段)与抗原决定簇之间结合的强度谓之抗体亲和力。亲和力之高低依抗体结合部位与抗原决定簇之间的分子空间构型及两者体积大小恰相适合的程度而定。亲和标记技术即是测定抗体结合部位的一种免疫化学方法，用以证明抗原与抗体结合的部位及数量。其原理是先用放射性同位素标记抗原或半抗原，并使之与相应抗体结合，然后把抗体水解成多肽，即把重链与轻链裂解，分离出已与抗原结合的多肽，测定同位素标记结合的部位及数量，从而标定抗体的结合部位及了解抗体结合价的特点。

应用有人用亲和标记技术直接鉴别结合部位的氨基酸残基。其做法是将一化学性质活跃的侧链连接到半抗原上，当此带有侧链的半抗原与相应抗体结合后，侧链即与邻近的氨基酸形成共价键，也就是说，结合部位邻近的氨基酸残基被标记了。也有人用叠氮基作侧链连接到半抗原上，并与相应抗体结合，经紫外线照射后，叠氮基转变成活化的硝基苯基，而硝基苯基能与任何有机基团接触形成共价结合。这种亲和标记可结合在重链与轻链二者的超可变区上。1